锌在长柔毛委陵菜细胞内的分布和化学形态研究-生态环境学报.DOCVIP

锌在长柔毛委陵菜细胞内的分布和化学形态研究 摘要：采用差速离心技术和化学试剂逐步提取法研究了Zn在长柔毛委陵菜（Potentilla grifithii Hook）叶片、叶柄和根系中的亚细胞分布和赋存形态。研究表明，细胞壁是Zn在长柔毛委陵菜细胞内的主要分布位点，其次是含核糖体的可溶部分和细胞核部分，而在叶绿体和线粒体的分布很少。叶片中，提高Zn处理水平，Zn向细胞壁和可溶部分的分配减少，而在细胞核部分的分配增加；叶柄中，提高Zn处理浓度增加了Zn在可溶部分的分配；根系中，Zn在各组分中的分配不受Zn浓度影响。在Zn赋存形态上，植物体内以氯化钠提取态和水提取态为主导形态；提高Zn处理水平，醋酸提取态的分配明显减少，水和乙醇两种提取态的分配增加；而其他形态Zn在植物体内的分配则很少。显示细胞壁和液泡是Zn在长柔毛委陵菜细胞内的重要结合位点，且可能主要与水溶性和酯溶性的有机配位体结合。 关键词：长柔毛委陵菜锌亚细胞分布化学形态A 文章编号：1672-2175（2006）01-0040-05在重金属严重污染的土壤或富含重金属的矿区地带，植被发生严重退化，但仍有一些植物能正常生长，它们经过长期的进化和自然选择，表现出特定的形态、结构和生理特征，具有很强抗重金属胁迫的能力，这些植物在重金属污染土地的植被重建和植被修复中起着决定性作用[1]。植物对重金属胁迫的抗性可通过两种途径来实现，即避性(Avoidance)和耐性(Tolerance)[2]。而对重金属的耐性，又包括金属排斥(exclusion)和金属富集(accumulation)两种途径，前者指重金属被植物吸收后又被排出体外，或者重金属在植物体内的运输受阻；后者主要指重金属在植物体内以不具生物活性的解毒形态存在，如结合到细胞壁、进入液泡、与有机酸或蛋白质络合等。本课题组野外调查中发现，长柔毛委陵菜具有很强的Zn吸收和超富集能力，其叶片、叶柄和根系的Zn含量分别达到13164 mg·kg-1、7751 mg·kg-1和5160 mg·kg-1 [3]，确定为一种新的Zn 超积累植物，但其如何富集Zn的机理尚未研究。因此，本文运用差速离心技术和化学试剂逐步提取法研究Zn在长柔毛委陵菜细胞内的亚细胞分布特征和结合形态，试图揭示该植物对Zn的耐性和富集机理，从而为研究超积累植物耐Zn的生理和分子生物学机制提供一定的理论依据。 1 材料与方法 1.1 植物培养 供试材料为长柔毛委陵菜植物幼苗，取自云南省兰坪县金顶镇的北场铅锌矿区，用水洗净后移至营养土中，预培养1个月（长出比较茂盛的根系），选择长势良好，且生长一致的幼苗，进行Hoagland营养液培养实验营养液组成为：Ca(NO3)2·4H2O 2.0 mmol·L-1，KH2PO4 0.10 mmol·L-1，MgSO4·7H2O 0.50 mmol·L-1，KCl 0.10 mmol·L-1，K2SO4 0.70 mmol·L-1，H3BO3 10.00 μmol·L-1，MnSO4·H2O 0.50 μmol·L-1，ZnSO4·7H2O 0.50 μmol·L-1，CuSO4·5H2O 0.20 μmol·L-1，(NH4)6M7O24 0.01 μmol·L-1，Fe-EDTA 100 μmol·L-1。设置低Zn（10 mg·L-1）和高Zn（100 mg·L-1）两个处理水平（以ZnSO4·7H2O加入），3个重复，每重复4株，营养液连续通气，每4更换一次，并用0.1 mmol·L-1NaOH调节pH至5.6左右，处理21后收获。植株根系先用自来水冲洗，再用20 mmol·L-1Na2-EDTA交换20 min，以去除根系表面吸附的Zn2+，最后用去离子水洗净，吸干表面水分，置于-20 ℃冰箱内供分析测定用。 1.2 试验方法 按Weigel and J?ger等[4]和Gabbrielli等[5]的方法改进后进行：准确称取鲜样0.5 g，加入20 m提取液0.25 mmol·L-1蔗糖+50 mol·Tris-HCl缓冲液(pH7.5)，研磨匀浆，用尼龙纱布过滤，滤渣为细胞壁部分（F1）；滤液在600×g下离心10 min，沉淀为细胞核部分（F2）；上清液在2000×g下离心15 min，沉淀为叶绿体部分（F3）；上清液在10000×g下离心20 min，沉淀为线粒体部分（F4）；上清液为含核糖体的可溶部分（F5），每组两次离心，全部操作在4 ℃下进行。 图1 不同Zn处理对长柔毛委陵菜中Zn的亚细胞分布的影响Fig. 1 Subcelular distribution of Zn in Potentilla grifithii Hook with different leve