电生物还原降解二氯酚的动力学特性及功能菌解析.pdfVIP

Vo l. 34 No.4 高等学校化学学报 2013 年4 月 CHEMICAL JOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES 964 -969 doi: 10. 7503/cjc 电生物还原降解二氯盼的动力学特性及功能菌解析 曹占平l ，张景丽2 ，张宏伟l (1.天津工业大学中空纤维膜材料与膜过程教育部重点实验室，天津 300387; 2. 天津城市建设学院环境与市政工程学院，天津 300384 ) 摘要 采用电辅助微生物(电生物)体系对二氯盼(2 ， 4-DCP) 进行了还原降解研究，应用聚合酶链式反应-单 链构象多肤技术(PCR-SSCP) 对微生物群落结构进行解析，并通过 165 rRNA 基因克隆及测序构建了系统进 化树.结果表明，电生物体系对二氯酷的降解符合零级反应动力学特征，体系中主要以肠球菌( Emerococ- cω) 、假单胞菌(Pseudomonas ) 和拟杆菌( Bacteroidales ) 为优势菌群，这些菌群在电子传递中起着主要作用 电生物体系中存在着电极与细胞色素 c 和脱氢酶的辅酶(NAD) 及污染物间的逆向电子传递途径，可实现电 极-微生物-污染物多相界间的长程电子传递. 关键词 电生物体系;电子逆向传递;微生物群落;二氯酣;细胞色素e 中国分类号 0646. 54 文献标志码 A 二氯酣(2 ， 4-DCP) 广泛用于染料、农药、有机物合成及医药等领域，是一类污染面广、毒性大、具 有持久性的难降解有机污染物，其污染的有效治理已成为重要的研究课题.目前采用零价铁(ZVI) 脱 氯和双金属脱氯的研究取得了一些研究成果[lm3 ，但其还原电位较高丑脱氯活性难以保持[4] Dolfing 等[5] 证实了在厌氧环境下微生物能以[HJ 的形式传递电子至氯酣从而实现还原脱氯，微生物还原脱氯 成为氯酣降解的主要方法，但需要持续的电子供体[6] 电生物体系是将电辅助引人微生物还原体系， 利用电辅助阴极较低的还原电位及阴极产氢(电子)提供连续有效的电子供体以及电辅助对微生物关 键降解酶的诱导驯化来强化微生物的还原降解过程[7 -9] 为了克服电子供体受限[肌12: ，提高做生物还 原降解效率，本文采用电生物体系研究了 2 ， 4-DCP 的降解，动力学特性和目标微生物群落的结构变化 和多样性，通过微生物电子传递体系(ETS) ，分析了电生物体系的精合机制及多相界面间的电子传递 过程，为有机物的高效降解提供了一种新的思路. 1 实验部分 1. 1 试剂与仪器 甲醇(色谱纯，天津市科密欧化学试剂有限公司) ，超纯水(美国 Milli-Q 超纯水系统) ，其它试剂 均为分析纯(天津大学科威公司). T6 紫外-可见分光光度计(北京普析通用仪器有限公司); e2695/ 2489 液相色谱仪(HPLC ，美国 Waters 公司) ; GeneAmp 9700 PCR 系统(美国应用生物系统公司); Mini Protean 3 垂直电泳槽(美国 Bio-Rad 公司) . 1. 2 分析测试 微生物电子传递体系的活性采用文献[13J 中 INT-分光光度法测定. 液相色谱条件: Waters Symmetry C18 色谱柱(300 mmx4. 6 mm , 5μm) ，流动相为甲醇-水(体积比为 4: 6) ，柱温为35 c ，进样量为 10μL，流速为 1 mUmin ，紫外检测器检测波长为 270 nm. 应用单链构象多肤技术(SSCP) ，采用 16S rRNA 基因片段放大，引物为 BSF8/20 (5-AGAGπÍ­ GATCCTGGCTCAG-3 )和 SRV3-2(5-TTACCGCGG CTGCTGGCA-3) (上海宝生科技发展有限公司) ，进 行 DNA 扩