第4章DNA复制王云.ppt

;涩斌衙愈抓玉幂挫堵郸希鄂烬阮宫蚌沿肛辅扮粤虞市龚腐吉掠臂脂硼挺恬第4章DNA复制王云第4章DNA复制王云;DNA复制可能的三种方式;由Meselson和Stahl设计证明半保留复制的实验的被誉为生物学最美丽的实验;半保留复制实验;15N标记DNA移到14N标记DNA培养基中;氯化铯密度梯度超离心;Meselson 和Stahl的证明DNA半保留复制的实验流程 ;Meselson 和Stahl的实验结果;Meselson与Stalh在42年以后在最初他们相遇的一颗树下重逢时的合影;半保留复制的实验结果;半保留复制进一步的实验证椐;15N;Taylor以蚕豆根尖细胞为材料、使用放射性同位素证明真核细胞DNA也是半保留复制的实验。;DNA的半保留复制;某些生物DNA复制的引物序列 ;证明DNA复制的方向始终是5′→3′的末端终止实验 ;DNA复制起始区的特征;DNA复制起始区的特征;电镜下真核生物DNA的多个复制叉结构;复制叉的结构;真核生物DNA复制子;Cairns的实验;Cairns证明大肠杆菌DNA双向复制的实验;Reiji Okazaki的实验;Okazaki的脉冲标记和脉冲追踪的实验;脉冲标记;脉冲追踪;Okazaki的脉冲标记和脉冲追踪的实验结果分析;不连续复制;在复制叉中不连续合成的DNA片段称为冈崎片段，连续合成的DNA子链被称为前导链，不连续合成的DNA子链被称为后随链或滞后链。 ;由于细胞内都存在有dTTP和dUTP，而DNApolⅢ却并不能区分它们，因此也会将dUTP加入到DNA中，形成A·U对。那么在DNA中为什么没有U的存在呢？这是因为E.coli细胞里有双重“保险”，防止了U的“混入”。?? 第一道关是细胞里的dUTPase，它能使dUTP变成dUMP，dUMP是不能作为DNA合成的底物，这样它就不再能加入DNA中。但总还有些漏网之“鱼”，它们还是逃过此关，混入DNA中，这就靠第二道关来清除“异己”，这道关的主角是尿嘧啶N-糖苷酶（uracilN-glycosylase），它可以切断混合尿苷的糖苷键，形成无Pu和Py位点（apurinicorapyrimidinic，AP），再由AP内切酶在AP位点切出一个缺口，进一步进行切除修复。在细胞内尿嘧啶N-糖苷酶作用较快，而AP酶作用较慢，在新链合成之初约1200bp就有可能掺进一个U，但很快就被尿嘧啶N-糖苷酶切断糖苷键，在AP酶未作用前在脉冲标记实验中就提取了，用NaOH沉淀时，AP位点十分易断裂，所以前导链也成了小片段。;衙质安悸虚为深样脾脐洽极囚垫信翘嚼魏诲诗疼桨沪奄污丢讶晤拆勋沧派第4章DNA复制王云第4章DNA复制王云;ＤＮＡ复制的速度和方向;砾娱否剐族滚坦旗暇乐糜喷谈晃亚忆菌智优摊舱蓬辰叭忽剑雅简喇缠畦首第4章DNA复制王云第4章DNA复制王云;DNA复制过程的三个阶段;（一）DNA复制的起始阶段;1、DNA复制起始点的结构特性;2、DNA复制的方向性;3、DNA复制的起始;（二）DNA链的延长;1、DNA聚合酶;真核生物DNA聚合酶　;DNA聚合酶的性质;2、与超螺旋松驰有关的酶;（三）DNA复制的终止阶段　;烈仗漏祭音利芋嫡板洪都立喻漓蛊畜贮榷侵除皿邹韵怯巨气格旬橱且搜此第4章DNA复制王云第4章DNA复制王云;骋蚌忽质苫换煎撑津磷洋湿低滇滓稽弦扰眠凰双圾圃崖胁奉逞瘸姻侮匣篓第4章DNA复制王云第4章DNA复制王云;;;性珐跋黑豹差妇亦荡嘎尸眼刊射箭慎澄邑沙全坪危蚌脸傅构抹尖陶蓑矣沪第4章DNA复制王云第4章DNA复制王云;“滚环复制”;滚环复制 ;D-环复制;D环复制 ;干细胞分裂过程中的“不朽链假说”;“不朽链假说”图解 ;原核生物DNA复制的特点;过程复杂；需要多种酶和蛋白质参与（包括拓扑异构酶、解旋酶、单链DNA结合蛋白、引物合成酶、DNA聚合酶及连接酶等）。;1. DNA复制的起始;大肠杆菌(E. coli)的 OriC 复制原点;参与DNA复制起始和引发的蛋白质;1.1 解旋酶（helicase) DNA复制时，解旋酶利用ATP的能量启动DNA解旋，使双连分开形成单链。 ; 在Ecoli中，解旋酶DnaB作为引发体的成员，参与复制叉形成，并结合于一个复制叉，利用ATP水解的能量解开双螺旋，推动复制叉向前延伸; 大部分DNA解链酶可沿后随链的5’-3‘方向随着复制叉的前进而移动，Rep蛋白则沿前导链模板的3’-5‘方向移动。 生物体内的解旋酶有多种，有些解旋酶还参与DNA修复，重组等非复制过程。 ;1.2 拓扑异构酶（topoisomerase) 可以使DNA的两种拓扑异构体互变的酶。 DNA分子在细胞内以超螺旋形式存在， DNA拓扑异构酶催化同一DNA分子不同超螺旋状态之间转变。 ;乳丹阵征蛊脐甘尿算玉蔫匈荫党衷翌野转