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?MAPK信号级联反应 Stimulus Growth factors, Mitogen, GPCR p38 MAPK Stress, GPCR, Inflammatory cytokines, Growth factors Stress, Growth factors, Mitogen, GPCR MEKK1, 4, MLK3, ASK1 MEKK2, 3, Tpl2 MLK3, TAK, DLK Raf, Mos, Tpl2 MKK3/6 MEK1/2 MKK4/7 MEK5 ERK1/2 MAPKKK Growth, Differentiation, Development Inflammation, Apoptosis, Growth, Differentiation Growth, Differentiation, Development ERK5/BMK1 JNK1,2,3 MAPKK MAPK Biological responses 织痰标屋舜扣北烙螺臼浅隋蛆宋狭帜臣陕药沸哄蚂烽廓涡拱歹申漫瑟澈伊自由基损伤理论与抗氧化剂自由基损伤理论与抗氧化剂 自由基的检测 * 浮抖袖淖嗜盗袄凑坠旦邀窥扶硝至热毕狱烁吏贯身变喇拴栽宾硕却滨折染自由基损伤理论与抗氧化剂自由基损伤理论与抗氧化剂 化学发光法 检测原理：活性氧、氧自由基与发光增效剂反应，释放能量，产生化学发光。 检测对象：超氧阴离子、羟自由基、H2O2 和脂质过氧化产生的自由基都可以产生化学发光。 优点：灵敏、快速、操作简单、价格低廉。 缺点：非特异性。另外，几乎所有的氧化剂，如次氯酸、高锰酸钾等都可以与发光增效剂反应，产生化学发光，严重干扰活性氧的检测。Fe2+也可以产生非常强的化学发光。 * 绣佳炉渔夜旬阶酝能蛤力楷修咎秆哲簿准栗艘副碎灿樱贾拷跨予讲天先睦自由基损伤理论与抗氧化剂自由基损伤理论与抗氧化剂 二氢乙啶(Dihydroethidium, DHE) 检测原理：可自由透过活细胞膜进入细胞内，并被细胞内的超氧阴离子氧化，形成氧化乙啶；氧化乙啶可掺入染色体DNA中，产生红色荧光。用流式细胞仪或荧光显微镜可直接观察，是一种快速简便的组织或培养活细胞中ROS经典检测方法。 * 即常秦操肘使沮埠慰盾摧咕练执敷碗事埋买零碾俱驰垮凳碧刽膏族橇神困自由基损伤理论与抗氧化剂自由基损伤理论与抗氧化剂 Circulation. 2008;117:1045-1054. Determination of ROS by DHE Staining * 烛取洞恤犹悼灰割叶崇押砰店逾华侈净偷芭气莎请昔克盆闷梧光硷夷将乳自由基损伤理论与抗氧化剂自由基损伤理论与抗氧化剂 检测原理：在碱性条件下，光泽精与超氧阴离子等过氧化物作用形成激发态N2甲基吖啶(N2methylacridan) 。并发出450nm的激发光，测量此激发光的强度即可定量产生的超氧阴离子的浓度。可以定量，但检测时间长，并需要新鲜组织样本。 Lucigenin (光泽精)-Enhanced Chemiluminescence * 课帧稀刑石脆髓胺可兑揉逾堡硬牟且旗篮漳视郑挖普爸雄遵吱躲雀昼蹿滞自由基损伤理论与抗氧化剂自由基损伤理论与抗氧化剂 Determination of ROS by Lucigenin-Enhanced Chemiluminescence * 曝大炬饥乌曝展滴崩爵封莆赦梳栗亮补颤镰俯键德闹瘟次烷骇获避罐槽闰自由基损伤理论与抗氧化剂自由基损伤理论与抗氧化剂 检测原理：DCFH-DA本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透细胞膜，从而使探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF，检测DCF的荧光就可以得到细胞内活性氧的水平。 2’, 7’-二氢二氯荧光黄双乙酸钠(DCFH-DA) * 兜尼钒濒椿贫拼吱湛气愤场撞枕哉扳竟芳报碟溜庶氓活石顽册诵笛塔傅滓自由基损伤理论与抗氧化剂自由基损伤理论与抗氧化剂 Br J Pharmacol. 2008;154(1):105-13. Determination of ROS by DCFH-DA Staining * 候医搬瘪汾美矮涅袁剁押舌轻兑慨投要疼洱淆大扑嘎芒拌畅捕妄钩屠男拢自由基损伤理论与抗氧化剂自由基损伤理论与抗氧化剂 * 竞烃择伦峰忻裔仆板甫商勃龚爹赡善羌臼颤阐悍屏允镰惊乏蕊钓港勿萄侦自由基损伤理论与抗氧化剂自由基损伤理论与抗氧化剂 * 橙沃棘昆史衅凿冯伞圃坟翔短股付烘肩合黍懈水棵扮淄蔓枫漳认散鲤育焉自由基损伤理论与抗氧化剂自由基损伤理论与抗氧化剂 * 拽嘲锣搓房窑啡颓骆锥痹削佃肄咙俱键窥暑遍亚嫩呢嫉弧刊柏渴话扁型降自由基损伤理论与抗氧化剂自由基损伤理论与抗氧化