菊欧文氏菌分子检测技术的研究.pdfVIP

植物病理学报 ACTA PHYTOPATHOLOGICA SINICA 37(6)：584-587(2007) ， 菊欧文氏菌分子检测技术的研究 刘 鹏，黄国明，刘 勇，崔铁军 (天津出入境检验检疫局，天津300456) 摘要：蝴蝶兰细菌性软腐病对蝴蝶兰的生长危害严重，Erwinia chrysanthemi(菊欧文氏菌)、Erwinia carotovora subsp．cart． tovora(胡萝卜软腐欧文氏菌胡萝卜软腐亚种)是引起蝴蝶兰软腐病的主要病原细菌，其中E chrysanthemi被列入我国三 类检疫性有害生物。本文对菊欧文氏菌分子检测技术进行了研究，设计出针对该病原细菌的特异性引物，应用实时荧光 PCR方法检测样品中存在的菊欧文氏菌，检测灵敏度达到10。cfu／mL。 关键词：菊欧文氏菌；特异性引物；检测 Molecular detection of Erwinia chrysanthemi LIU Peng，HUANG Gut—ming，LIU Yong， CUI Tie-jun (Tianjin Entry—Exit Inspection and Quarantine Bureau，Tianjin 300456，China) Abstract：Bacterial soft rot causes great loss to the growth of butterfly orchid．Erwinia chrysanthemi and Er- winia carotovora subsp．carotovora are the main bacterial pathogen led to rot disease．In the study，the mole— cular technology had been primarily established to detect E．chrysanthemi，the potential serious quarantine pathogen．The specific primers was designed to the detection of E．chrysanthemi and real·time fluorescent PCR method could achieve high sensitivity． Key words：Erwinia chrysanthemi；specific primers；detection 中图分类号：$432．42 文献标识码：A 文章编号：0412-0914(2007)o6-o584-o4 菊欧文氏菌(Erwinia chrysanthemi)属于肠杆 体DNA 16S-23S区域的特异性引物，以期从DNA 菌科(Enterobacteriaceae)欧文氏菌属(Erwinia)，主 水平对菊欧文氏菌进行检测和鉴定。 要引起花卉的软腐病。对温室内及进境花卉样品 欧文氏菌属在近l0年问分类地位变化较大， 中可能存在的病菌进行早期检测有利于控制病害 新建立的属有泛生菌属(Pantoea)和果胶杆菌属 的发生和传播。在细菌的分子检测技术中，一些特 (Pectobacterium)，欧文氏菌属只保留了该属模式 有的序列可被用来设计特异性引物以检测目的病 种梨火疫欧氏杆菌(Erwinia amylovora)及相关种。 原细菌的存在。实际上可以利用的序列很多，有的 菊欧文氏菌被划分到果胶杆菌属中，由于传统和习 是来自于未知基因，如RAPD扩增所得的特异性 惯问题，在植物病理学界的文献中仍常使用欧文氏 扩增片段；也有的是来自于已知基因，如致病基因、 菌属名称，所以本文中归入果胶杆菌属的菌种其属 质粒DNA或核糖体DNA等。利用病原菌在核糖 的拉丁名仍为Erwinia。 体DNA的ITS区段既具保守性，又在科、属、种的 本研究在传统PCR基础上应用了实时荧光 水平上具有特异性，对其序列进行比较分析常用来 PCR方法 (SYBR Green I荧光染料法)，提