丙烯酰胺单克隆抗体的制备-北京农业职业学院学报.pdf

第31卷 第4期 北京农业职业学院学报 Vol.31 No.4 2017年7月 Journal of Beijing Vocational College of Agriculture Jul. 2017 丙烯酰胺单克隆抗体的制备 句荣辉，王  辉，段丽丽，王  丽，汪长钢 （北京农业职业学院，北京 102442 ） 【摘  要】丙烯酰胺分子量小，结构简单，因此制备其特异性抗体比较困难。试验将丙烯酰胺与间巯基苯甲酸反应 合成丙烯酰胺半抗原，半抗原偶联KLH 载体蛋白合成抗原，通过免疫制备单克隆抗体，并对其进行了抗血清的效价、 半抑制率、交叉反应测定。结果表明：免疫原为AM-KLH，包被原为AM-OVA 测定的抗血清效价最高为1:32 000 倍， 其半抑制率 （IC ）为120.323 ng·mL-1 ，该抗体与丙烯酰胺近似物的交叉反应率均1.48 。探索了丙烯酰胺单克隆抗体 50 的制备方法，为丙烯酰胺快速检测方法的建立提供了新的思路。 【关键词】丙烯酰胺；单克隆抗体；半抗原合成 【中图分类号】TS201.2 【文献标识码】A 【文章编号】1671-7252 （2017 ）04-0020-05 丙烯酰胺是合成聚丙烯酰胺的原料，其分 性，不能刺激动物机体产生抗体，只有与大分 子中含有胺基和双链，化学性质相当活泼，可 子物质偶联成完全抗原才能促使动物机体产生 以发生霍夫曼反应、水解反应、迈克尔加成反 免疫反应，从而获得抗体。目前丙烯酰胺免疫 应和聚合反应等。含高碳水化合物的食品经过 检测技术大多集中在多克隆抗体的研制及检测 煎、烤、炸等发生美拉德反应会产生丙烯酰胺， 方法的建立方面。 丙烯酰胺广泛存在油炸或烘焙的马铃薯和谷物 本研究通过迈克尔加成反应合成丙烯酰胺 类食品当中，被国际癌症研究中心列为二类致 半抗原，半抗原经重氮化法处理后分别偶联载 癌物，即人类可疑致癌物。目前丙烯酰胺的检 体蛋白，获得稳定的人工抗原后，经动物免疫 测方法主要有高效液相色谱法 (HPLC)、气相色 制备效价高、特异性较强的单克隆抗体，为利 谱—质谱分析法 (GC-MS)、液相色谱—质谱分析 用丙烯酰胺单克隆抗体建立快速检测方法的奠 法 (LC-MS)、毛细管电泳等。这些方法都需要昂 定基础。 贵的仪器设备，成本较高、检测耗时长、操作 1 材料与方法 复杂，难以适应大范围检测的需要。 基于抗原—抗体的酶联免疫方法具有特异 1.1材料 性强、简单快速、灵敏度高等优点，可以作为 1.1.1材料与试剂 仪器检测的有效补充。但是，由于丙烯酰胺分 丙 烯 酰 胺 标 准 品， 德 国 Dr.Ehrenstorfer 公 子量小，结构非常简单，其本身不具备免疫原 司，购于国家标准物质中心；间巯基苯甲酸 95% 【基金项目】北京农业职业学院博士基金项目 （XY-BS-14-01 ） 【收稿日期】2016-12-23 【作者简介】句荣辉 （1978— ），女，黑龙江肇东人，北京农业职业学院食品与生物工程系副教授，博士。研究方 向：食品质量与安全检测。 — 20 — 句荣辉等：丙烯酰胺单克隆抗体的制备 纯度，购于北京百灵威科技有限公司，活性剂 1.2.3 丙烯酰胺单克隆抗体的制备与纯化 （EDC [1- 乙基 -3-(3- 二甲氨丙基 )- 羰二酰亚 1.2.3.1 动物