土壤生物学虚拟实验-中国农业大学研究生院.PPT

土壤生物学实验 氯仿熏蒸法 （一）熏蒸培养法（FI） 1. 实验原理 实验原理-转化 实验原理-设置对照 实验步骤-称样 实验步骤-熏蒸 实验步骤 熏蒸24小时 实验步骤- 接种 实验步骤- 接种培养 实验步骤-培养 实验步骤-释放的CO2 实验步骤-释放出的CO2测定 实验步骤-回滴剩余的NaOH 实验步骤-滴定终点 微生物组织C矿化系数获得 结果计算 适用范围-新鲜有机物质 适用范围和注意事项 适用范围-pH和含水量 注意事项 * 中国农业大学资源与环境学院 赵小蓉 李贵桐 张宝贵 实验一 土壤微生物生物量测定 氯仿熏蒸法 1. 实验原理 2. 实验步骤 3. 结果计算 4. 适用条件 活的微生物细胞 C C C CH3Cl CH3Cl CH3Cl CH3Cl CH3Cl C 死亡微生物细胞 氯仿熏蒸杀死微生物； 接种微生物，将被氯仿杀死的微生物组织C、N转化为无机C (CO2） 、N （NH4、NO3)； 将产生无机C 、N的量除以的矿化系数即可得到微生物量C 、N 有机C C C C C C C 接种微生物，将被氯仿杀死的微生物组织C、N转化为无机C (CO2） 、N （NH4、NO3) 熏蒸（F） 未熏蒸（UF） 接种1%新鲜土壤 1.3 产生的CO2有很少一部分来自土壤非生物有机物质的分解(CO2som) CO2mb = FCO2- UFCO2 CO2mb CO2som CO2som CO2总量 熏蒸（F） 未熏蒸（UF） 25.00g 称取土样: 3份（熏蒸、不熏蒸、含水量），每份约25克 将盛有拟熏蒸土样的小烧杯和分别盛有氯仿、水(防止土样变干)和0.5N NaOH (吸收CO2)小烧杯一同放入真空干燥器; 抽真空至氯仿沸腾，2 min后关闭干燥器； 将不熏蒸土样同样处理，但干燥器中不加氯仿 H2O CH3Cl NaOH CHCl3 NaOH H2O 在黑暗和25℃下培养24h 微生物细胞膜破裂 抽真空除去氯仿 在土样中加入1%新鲜土壤以接种微生物，继续培养10天 熏蒸 不熏蒸 新鲜土壤1% NaOH 2.5 培养（25℃，10d） CO2释放的总量中有一少部分来自于土壤中非生物 的有机物质的分解（CO2som） 熏蒸土样 不熏蒸对照 NaOH CO2som CO2 CO2mb = - 来自氯仿熏蒸死亡的微生物分解产生的CO2 FCO2 UFCO2 NaOH 碱液吸收，BaCl2沉淀形成的碳酸钠，用HCl回滴剩余的碱 NaCl+H2O NaOH+Na2CO3+BaCl2 NaOH+BaCO3 酚酞红色 酚酞红色 无色 +HCl 测定所吸收的CO2 HCl BaCl2+酚酞 HCl BaCl2+酚酞 2.6 测定所吸收的CO2（滴定） 纯培养微生物量C =（FCO2 - UFCO2）/ Kc 矿化系数Kc = CO2/生物量 = 0.41（22 °C） = 0.45（25°C） 75% 25% CHCl3 CO2 * 微生物量C =（FCO2 - UFCO2）/ 0.45 3 2 1 Final UF干重 Final F干重 接种干重 接种重 UF干重 UF 重 F干重 F 重 含水量 盒+干土 盒+土 盒重 Step 4 Step 1 3 2 1 mg / g soil mg CO2-C/g soil ml Units 微生物量C UF F 空白 UF F 计算 Step 6 （HCl消耗量） 微生物量C测定记录表 不适用于新鲜有机物质多的土壤 土壤中易分解的有机物质较多时, 来自非生物有机质的CO2大； 熏蒸与未熏蒸土样中来自非生物有机质的CO2不等（未熏蒸中活的微生物群体大，而熏蒸土壤中仅有1%含有活的微生物） 4.1 不适用于新鲜有机物质多的土壤：非生物CO2大且熏蒸与未熏蒸土样不等（未熏蒸中活的微生物群体大，分解能力强） CO2mb CO2som CO2som CO2总量 熏蒸（F） 未熏蒸（UF） CO2som 不适用于强酸性或含水量过高的土壤：新接种的 微生物定殖慢，熏蒸与非熏蒸对照土壤来自非生 物有机物质分解的CO2量不等； 不同土壤特别是pH不同时，土壤微生物群落结构 不同，Kc值变化 碱液吸收CO2：浓度不能低于1.0N；操作者呼出CO2可能影响结果 。 BaCl2沉淀形成，HCl回滴至终点时颜色由粉红色变无色，不易掌握 。 ? 1.2 直接提取测定氯仿熏蒸杀死的微生物所 释放的有机C F UF 1. 实验原理 3C+K2Cr2O7+8H2SO4