中期因子的细胞核定位及其对rRNA转录和细胞凋亡影响的研究.pdfVIP

浙江大学硕士论文 中文摘要 中期因子(midkine,Ml()是一种多功能的肝素结合生长因子，分子质量约 13kD，它在各种恶性肿瘤，如肝癌、胃癌、乳腺癌、膀胱癌、胰腺癌、Wflms 肿瘤等中高度表达，在正常成人组织中几乎不表达。MK的表达量随着肿瘤的恶 化而不断地升高，在肿瘤晚期或者后期的表达量要远远高于初期，而且在多种肿 瘤患者的血液甚至尿液里也能检测到高表达的MK蛋白，提示MK可以成为肿 瘤诊断的靶分子。 关于MK在细胞内的定位，尚有不同的认识。有研究者发现，MK定位于细 胞质中；也有研究者发现外源性的MK能够被L细胞内吞，然后转运进入细胞 核中。因此对于MK的细胞精细定位，仍是值得深入探讨的问题。本研究利用 MK与绿色荧光蛋白(GFP)融合蛋白， 追踪MK在HepG2细胞内的定位，同 时，利用免疫胶体金技术，研究其在细胞核中的精细定位。结果发现，MK能转 移到细胞核，并在核仁大量富集。在核仁中，MK主要定位于致密纤维区(dense fibrillar component，DFC)和颗粒区(granularcomponent，GC)，此外，在致密 fibrillar 纤维区和纤维中心(the center，Fc)的交界处也有一定量的分布。由于 核仁是核糖体rRNA转录和加工的重要场所，因此，我们运用荧光定量PCR等 方法，研究了MK与核糖体RNA转录的关系，发现抑制MK的表达，能显著降 低455rRNA前体的转录，而增加MK的表达，则能发挥细胞的抗凋亡作用。肿 瘤细胞的重要特点是无限增殖，因此蛋白质合成增加，需要加速rRNA的转录和 加工。MK提高了HepG2细胞的rRNA转录，说明其与肝癌细胞的快速增殖有 关。提示可以通过降低MK在癌细胞中的表达水平，实现治疗肿瘤的目的，这对 于今后研发诊断和治疗肿瘤的试剂盒具有重要的意义。 关键词：中期因子；细胞核定位；核糖体RNA；转录 浙江大学硕士论文 Abstract is a kDa．Itis MKa withmole嬲alar of13 growthprotein weight heparin-binding c缸bedetected embryogenesis．Moreover,it stronglyexpressedduringmidgestation in inmost ata levelatissue manner, carcinoma印ecimcnshigh type-independent onesof includingesophageal,gastric,gall carcinom孤and itrestrictedinnormaladulttissues．MK lung Wilms’tumors,while increases ofhuman canbe also with carcinomas．Also，it expression advancingstages detectedin and of with is linkedto