基于差异蛋白质组学解析紫色杆菌素抑制结肠癌细胞-中国农业科学.PDF

中国农业科学 2017,50(9):1694-1704 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2017.09.015 基于差异蛋白质组学解析紫色杆菌素抑制结肠癌细胞 HT29的作用机制 刘鹭，芦晶，王莹，逄晓阳，许嫚，张书文，吕加平 （中国农业科学院农产品加工研究所/农业部农产品加工与质量控制重点开放实验室，北京 100193 ） 摘要：【目的】对紫色杆菌素作用后的结肠癌细胞HT29进行差异蛋白质组学分析，探究其影响的代谢通路， 揭示其抑制癌细胞生长的作用机制，为新型抗癌药物的开发提供一定的参考。【方法】以不同剂量的紫色杆菌素处 理 HT29 24、48、72 h，通过 MTT 试验以及透射电镜分析其对结肠癌细胞的有效抑制剂量及抑制情况。在此基础 上，对提取的3 个处理组的蛋白进行同位素标记，利用反相液相色谱（RP-LC）联用串联质谱（AB SCIEX Triple TOF 5600）获得样品中的多肽及其相对丰度信息，通过数据库（NCBI. Human. protein database）搜索比对，鉴定差 异表达蛋白。利用GO分析、KEGG信号通路分析，解析紫色杆菌素抑癌作用代谢途径。【结果】紫色杆菌素对HT29 的抑制作用呈一定的时间、剂量依赖性。当紫色杆菌素对HT29的抑制率达50%时，仅为阳性药物5-Fu剂量的1/6， 具有更明显的抑制效果。电镜下观察显示，随着紫色杆菌素剂量增大，细胞内部线粒体出现空泡结构，质膜出泡； 当浓度达 30 mg·L-1 时，细胞膜消失，染色质边集。通过差异蛋白质组学分析，共鉴定出 4 258 个蛋白，表达差异 在 2 倍以上的蛋白共为 757 个。其中高剂量组处理差异蛋白数为 492 个，低剂量组处理的差异蛋白数为 112 个， 阳性对照组差异蛋白数为336个。KEGG分析显示这些差异蛋白共参与50条信号通路。其中有10条信号通路具有 显著性（P0.05），主要参与核糖体循环途径、三羧酸循环途径和 RNA 降解途径等。【结论】紫色杆菌素主要通过 影响HT29细胞生命活动中的蛋白转录和翻译水平进而发挥抑制作用。 关键词：差异蛋白质组学；紫色杆菌素；HT29；iTRAQ同位素相对标记和绝对定量；透射电镜 Antitumor Effect of Violacein Against HT29 by Comparative Proteomics LIU Lu, LU Jing, WANG Ying, PANG XiaoYang, XU Man, ZHANG ShuWen, LÜ JiaPing (Institute of Agro-products Processing Science and Technology, Chinese Academy of Agricultural Sciences/Key Laboratory of Agro-Food Processing and Quality Control, Ministry of Agriculture, Beijing 100193) Abstract: 【Objective 】The objective of this experiment is to investigate proteomic profile of HT29 treated with high-dosage-violacein and low-dosage-violacein, and to analyze its involved metabolic pathway and mechanism. 【Method 】 Cytotoxic activity of violacein was analyzed by MTT ass