抗体纯化的亲和填料的选择.PDF

抗体纯化的亲和填料的选择 用于抗体纯化的亲和层析是基于蛋白 A或者蛋白 G与IgG的Fc-区具有高度亲和特异性。蛋白A或者蛋白G被固定 在球状的支持介质上，用于从腹水、细胞培养上清液或者血清中分离IgG和IgG亚类。接下来阐述一下关于抗体亲和 纯化的系列产品之间的差别。 蛋白A (Protein A) 来源于金黄色葡萄球菌，它含有5个可以和抗体IgG分子的 Fc段特异性结合的结构域，可以特 异性的和样品中的抗体分子结合，而使其他杂蛋白流穿，具有极高的选择性，通常一步亲和层析就可达到超过95% 的纯度。ProteinA sepharoseCL-4B，是将纯化后的金黄色葡萄球菌表面蛋白A通过CNBr活化的方法偶联在sepharose CL-4B的介质上，可以纯化体液或细胞培养液中的免疫球蛋白。nproteinA sepharose4FF，nprteinA即为天然 (Native ProteinA)，表示其在生产过程中没有引入任何动物来源的组分。rproteinA sepharose4FF，重组的蛋白A (rProtein A)， 经基因工程改造后含有一个C末端半胱氨酸，可以单一位点定向偶联于琼脂糖骨架上，有效降低空间位阻，增加了 与 IgG 的 结 合 能 力 。 rmpProteinA ， 采 用 多 位 点 附 着 技 术 偶 联proteinA ， 保 证 更 低 的 配 体 的 脱 落 。 2005年我们推出了新一代的抗体纯化填料MabSelect ，使用了高流速琼脂糖凝胶 ( High flow Agarose) 作为骨架， 是新型的蛋白A亲和填料，专为大规模抗体纯化而设计。相比传统Fast Flow填料，高流速琼脂糖具有高流速低反压， 具有更快的传质速度，Mabselect sure的蛋白A配基是经过基因工程改造后的蛋白A，可以耐受氢氧化钠的清洗，更 低的配体脱落，寿命更长、更经济，适合快速高效的抗体分离纯化，已经成为治疗用单抗实验室纯化和生产的标准 介质 。2011年我们有推出了新产品MabSelect LX，动态载量高达60mgMab/ml 填料，非常适合高表达的抗体的大规 模纯化。 蛋白G是G族链球菌的一种菌体表面蛋白，是Ⅲ型Fc-受体，与IgG结合类似于蛋白 A。我们提供的蛋白G亲和填料的 配基为大肠杆菌表达的重组蛋白G，基因敲除了天然蛋白G的白蛋白结合区域，因此用于抗体纯化具有更高的转一性， 其填料和预装柱形式包括HiTrap Protein G HP、Ab SpinTrap、ProteinG Sepharose 4 Fast Flow、GammaBind G Sepharose和GammaBindPlus Sepharose等 ，重组蛋白 G含有两个 Fc结合区。预装有Protein G SepharoseHigh Performance填料的Ab SpinTrap层析柱，可以通过离心的方式方便地捕获和纯化单克隆和多克隆抗体。 尽管蛋白 A 和蛋白 G 亲和填料在许多方面是类似的，但对不同来源的 IgG 的特异性却略有不同。对一般抗体的纯化 选择蛋白 G 亲和填料是一种不错的选择，因为它可以结合更广范围的 IgG，并且可以结合更多的 IgG 亚型。对于蛋 白 A 和蛋白 G 对于不同来源的 IgG 的结合特异性可以参见下表。 、