肝脏特异性F蛋白的克隆表达及其多抗制备.pdfVIP

中文捅要 作者姓名：段樱 论文题目：肝脏特异性F蛋白的克隆表达及其多抗制各 导师姓名：刘树业 中文摘要 肝脏疾病严重影响人类健康，并对社会经济发展产生巨大影响。肝癌是世界上死 亡率最高的恶性肿瘤之一，病毒性肝炎、肝纤维化、肝硬化等都是肝癌主要的致病原。 因此肝病的诊断就成为医学诊断学的重要组成部分。人类肝脏F蛋白是一种新型的尚 未应用于临床的直接反映肝损伤程度的生物学标志之～。从80年代开始，人们开始 研究血清F蛋白含量与肝损伤程度的关系，获得了一些临床数据。肝细胞中的F蛋白 浓度与血清F蛋白的浓度之间存在的巨大差异以及F蛋白的严格的组织特异性，使其 成为一种非常有希望的反映肝细胞损伤程度的灵敏和特异的指标。目前，肝脏特异性 F蛋白的研究与临床应用受到越来越多的关注。 本文在前人研究的工作基础上，从新鲜人肝脏组织提取肝脏总mRNA，确定其纯 载体进行连接获得克隆质粒pUcllrT—F并转化到大肠杆菌DH5a中；将测序结果正确 IDAHis-bind (Ni”-charged column)纯化，用十二烷基硫酸钠一聚丙稀酰胺凝胶电 泳与免疫印迹(Westernblot)对其进行检测。以此蛋白为抗原免疫兔子制备兔抗人 F蛋白多克隆抗体，用间接ELISA法；91：4定其抗体的效价，用免疫印迹检测其特异性。 人F蛋白的基因克隆结果显示同的基因大小为1200bp左右，与预期值相符。表 达后的全菌蛋白进行SDS电泳榆测，目的条带分子量大小约为43kD，与文献报 应为阳性，说明我们经基因工程方法得到的纯化的F蛋白具有免疫活性。间接ELISA 显示制备的抗体与提纯的人肝脏特异性F蛋白发生了反应，表明我们制备的抗体具有 免疫特异性，可用于后续的实验研究。 肝脏特异性F蛋白是反映肝损伤的一种灵敏、有效而又稳定的指标，同时F抗原 在肝病早期诊断与治疗、药物的筛选与疗效观察、治愈状况、肝损伤程度的判断等方 面以及法医学方面、免疫耐受肝移植抗排斥方面的研究都具有重要的应用价值。用化 学提纯的方法很难得到大量F抗原，这就阻碍了其他研究的进行。因此，本文采用基 因工程方法得到人肝脏F抗原的基因克隆，并诱导表达人肝脏F蛋白，解决了其来源 问题。同时以此基因工程蛋白为抗原制备多克隆抗体，并通过免疫印迹法证实了此抗 体的特异性，为下一步的免疫试剂最适条件的摸索、免疫耐受及其免疫学特性等研究 打下基础。 关键词： F蛋白肝脏肝病克隆免疫 塑!幽 The and oftheliver F cloningexpression specificprotein andthe of preparationpolyclonalantibody Duan Ying Liverdisease aseriouseffecton0111health，andwillhavea have great may effectOnthesocialandeconomic cancerisa tnlnor development．Livermalignant whichWaSoneofthe deathratesintheworld．Virus fibrosis， highest hepatitis，hepatic andSOonalethe causesoflivercancelSothe of hepatocirrhosis primary