内皮抑素联合放射对人肺腺癌A549细胞的作用.docVIP

　　内皮抑素联合放射对人肺腺癌A549细胞的作用 【摘要】 目的 研究放射联合内皮抑素对肺腺癌细胞系A549的作用以及对血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法 ①以不同浓度的内皮抑素与A549细胞作用不同时间，MTT法选择生长抑制率≤20%的药物浓度(IC20);②将细胞分为对照组，单纯照射组，单纯用药组，药物与照射联合组，联合组分3个亚组，分别为加药培养24h、48h及72h后再照射2Gy。比较细胞存活分数,选择最佳药物作用时间;③用200mg/L药物浓度作用实验组，药物作用48h后X线0、2、4、6、8Gy剂量照射，绘制细胞存活曲线，与单纯照射组比较，计算增敏比(SER);④ELISA法检测各组细胞上清液中VEGF值。结果 200mg/L浓度内皮抑素的放射增敏作用在药物作用48h后最为明显，增敏比为1.61、1.04;放射联合内皮抑素可降低肺癌细胞放射治疗后VEGF水平的表达。结论 内皮抑素对离体非小细胞肺癌A549细胞系具有放射增敏作用，且最佳照射时间为药物作用后48h，其增加放射敏感性可能的机制为降低肿瘤细胞VEGF的水平。 【关键词】 癌;非小细胞肺;细胞系;肿瘤;内皮抑素;放射增敏 ABSTRACT: Objective To study the synergistic effect of endostatin (YH16) and irradiation on human nonsmall cell lung cancer (NSCLC) cell line A549 and the expression level of vascular endothefial groe. The optimal concentration giving ≤20% inhibition concentration (IC20) by MTT assay otherapy alone, radiotherapy alone, and radiochemotherapy group. All groups ent, the cells survival fraction and the plating efficiency of the four groups provided to select the optimal radiotherapy dosage. ③ The radiochemotherapy group had been exposed to endostatin for 48 hours, follog/L endostatin culture medium the value of SER radiated by linear accelerator in 2Gy after 48h e could decrease the VEGF level. Conlusion It is suggested that endostatin enhances the radiosensitivity of NSCLC A549 cell line in vitro (SER=1.61, 1.04). The enhancement depends on the time of exposure drug. The optimal radiation time should be 48 hour after exposure. 　　KEY I1640培养液，胰蛋白酶为Invitrogen Gibco公司产品。胎牛血清购自杭州四季青生物公司。噻唑蓝(MTT)为Sigma公司生产。人VEGF ELISA试剂盒购自深圳晶美生物工程有限公司。 　　1.2 细胞培养 A549培养于PRMI1640培养液(含mL/L热灭活小牛血清，青霉素100mg/L及链霉素100mg/L)中，置于37℃，50mL/L CO2饱和湿度培养箱中培养。细胞经过2.5g/L胰蛋白酶消化传代，取对数生长期的细胞进行实验。 　　1.3 MTT法检测内皮抑素对A549细胞的毒性 选取对数生长期的A549细胞接种于96孔板，经胰酶消化，血球计数板上计数，确保活细胞在97%以上，调整细胞浓度2×104/mL，100μL每孔，加入96孔培养板中。将培养板放入37℃，50mL/L CO2培养箱培养，待细胞贴壁后取出，加入不同浓度内皮抑素，使其终浓度为500、100、50、25、10、5、1、0.5、0.1g/L。每个浓度设置5个复孔。同时设空白对照组和调零孔。培养板放回培养箱中分别继续培养24、48、72h。取出培养板每孔加入50μL MTT(5g/L)。再将培养板放回培养箱中培养4h。吸出上清液以PBS洗涤1次，加入150μL DMSO。在平板摇