激光拉曼光谱介绍概要1.pptVIP

光散射现象 拉曼光谱的发现 拉曼光谱的发现 拉曼光谱的基本原理 拉曼光谱的基本原理 拉曼光谱的基本原理 拉曼光谱的基本原理 Avoidance of fluorescence: background-free Raman spectra 红外 拉曼 分子振动谱 吸收，发展较早 平衡位置附近偶极矩变化不为零 与拉曼光谱互补 实验仪器是以干涉仪为色散元件 测试在中远红外进行，不受荧光干扰 低波数（远红外）困难 微区测试较难，光斑尺寸约10微米，空间分辨率差 红外探测器须噪声高，液氮冷却，且灵敏度较低 多数须制备样品 水对红外光的吸收 分子振动谱 散射，自激光后才发展 平衡位置附近极化率变化不为零 与红外光谱互补 实验仪器是以光栅为色散元件 测试在可见波段进行，有时受样品荧光干扰，可采用近红外激发 低波数没有问题 共焦显微微区测试，光斑尺寸可小到1微米，空间分辨率好 CCD探测器噪声低，热电冷却，灵敏度高 无须制备样品，且可远距离测试 没有水对红外光吸收的干扰 散射信号量的总计算公式 拉曼光谱的基本原理 拉曼光谱的优缺点 优点: 可以得到高光谱分辨的谱图 不受溶剂水的影响 可以方便的改变激发光的波长 共振拉曼光谱RRS 激光共振拉曼光谱（RRS）产生激光频率与待测分子的某个电子吸收峰接近或重合时，这一分子的某个或几个特征拉曼谱带强度可达到正常拉曼谱带的102～106倍，并观察到正常拉曼效应中难以出现的，其强度可与基频相比拟的泛音及组合振动光谱。 与正常拉曼光谱相比，共振拉曼光谱灵敏提高，可用于低浓度和微量样品检测，特别适用于生物大分子样品检测。 表面增强拉曼光谱SERS 当一些分子被吸附到某粗糙金属，如金、银、铜的表面时，它们的拉曼光谱强度会增加104～106倍，这种不寻常的现象被称为表面增强拉曼散射效应，简称表面增强拉曼光谱（SERS）。 由于SERS有很高的灵敏度，能检测吸附在金属表面的单分子层和亚单分子层的分子，又能给出表面分子的结构信息，因此它是一种表面研究的有效技术。 SERS效应只在少数基体表面能观察到，其中银、金、铜被广泛做为SERS的金属基体，它们能显示出很大的增强效应。镍、铝等少数金属也能显示出一定的增强作用，但增强因子小。 金属表面必须被粗糙化一定程度才能显示出SERS效应。实验还表明，SERS强度与激发光频率、入射角、吸附分子在金属基体表面的覆盖度、分子离基体表面的距离等有关。 SERS的生物医学应用 共焦显微拉曼谱仪原理 光源针孔的作用是将所形成的点光源成像到焦平面样品上，实现了微小的照明区域。由于只有被照明的部分样品散射或反射的光信号才会被接受，所以保证了显微镜的横向空间分辨率。在光源照明区域内，但不在焦平面上的样品也会散射或反射光信号，背景上的杂散光因为处于样品上离焦区域，所以被与光源针孔共焦的探测针孔所形成的空间滤波器强烈地衰减。这样对信号的主要贡献是处于焦平面上的样品被显微镜所观察的那一薄层的信号，保证了显微镜的纵向空间分辨率。 共焦显微拉曼谱仪原理 激光共聚焦显微拉曼光谱系统 拉曼光谱仪系统组成部分 不同焦长光谱仪的分辨率 傅里叶变换拉曼光谱仪 傅里叶变换拉曼光谱仪的特点 由于采用近红外激光激发，可避免荧光干扰，扩大拉曼光谱的应用范围，有很高的信噪比； 用近红外光激发，能量低，可避免样品的光解和热解； 傅立叶变换拉曼有分辨率高，波数精确和重现性好的优点。测量精度可达到10~3 cm-1，并且重现性好； 傅立叶变换拉曼光谱仪的测量速度快，一次扫描可完成全波段扫描范围测定； 傅里叶变换拉曼光谱仪操作方便。 傅里叶变换拉曼光谱的应用 激光功率密度问题 镜头的选择 检测器的优化 入射收集方式和样品处理 采样过程 共聚焦拉曼谱仪通常备有几个不同放大倍数或数值孔径的镜头。要结合不同的实验要求，综合收集效率，空间分辨率及工作距离等几个因素使用相应的镜头： 如果需要高的空间分辨率则应选择高放大倍数的镜头；如50×、100×的镜头 对于易挥发，腐蚀性样品的测试则应选择长工作距离的镜头，并且一般还要用PVC或PE薄膜包裹来保护镜头，或者可以在样品上方加窗片来隔离，一可以有效的防止暴露在空气而受到污染,二也可以有效的保护镜头 如果要高的光收集效率，则选择数字孔径大（通常倍数是高的放大倍数）的镜头；具体考虑如下： 是显微镜物镜收集光和分辨物体细节的能力 NA=n·sin? n:镜头前空间中介质的折射率， ?：镜头孔径张角的一半 增大NA的方法： a. 油浴－大的n值 b. 高倍镜头－大的?值 c. 盖玻片校正－调整光行差 f D NA大 NA小 ? ? 数值孔径 强度与灵敏度的选择,信号的binning处理，pinhole，slit的设置， CCD区域的