免疫荧光 样品制备及体会.pdfVIP

2015/6/12  免疫荧光细胞化学技术：将抗体标记上荧光素 （如FITC、TRITC），与细胞内相应抗原（目标 蛋白）结合后，通过观察、检测具有特征性的荧 光，可以定性、定位及定量的显示和检测细胞内 目的蛋白的方法称为免疫荧光细胞化学技术。 免疫荧光细胞样品制备及体会  结合了免疫反应的特异性和荧光检测的灵敏性。  常用方法：直接法、间接法和双标记法。  使用免疫荧光染色，我们可以方便的观察目的蛋 蛋白质的不同定位提示其可能具有的功能： 白在细胞中何时表达，对目的蛋白进行定性（有 胞浆：参与细胞内信号转导，蛋白质转运 无表达）、定位（胞浆、胞核或胞膜）分析，以 胞核：可能是转录因子参与DNA转录，基因 表达调节因子 及比较其表达量的多少。 胞膜：离子泵，参与构成离子通道、细胞间  不同的抗体通过标记不同的荧光染料，我们可以 通讯，细胞内外物质交换，作为细胞因子受 同时观察细胞中两种或多种蛋白的表达和分布。 体 比较常用的荧光染料： 荧光染料 FITC 蓝光 绿光 具有吸收一定频率光能，并产生一定光量子的 TRITC 绿光 红光 荧光团，在一定波长的激发光作用下可发射不 同颜色的荧光。 Cy3、Cy5 绿光 红光 尽量了解所使用的荧光染料的特性：如激发光 PI 绿光 红光 谱和发射光谱。 DAPI 紫外 蓝光 Hoechst 紫外 蓝光 1 2015/6/12  未标记抗体（一抗）先与细胞 直接用荧光标记的抗体 中的相应抗原结合，再用荧光 与细胞中的相应抗原结 素标记的抗体（二抗）与一抗 合。本法简便快速，非 结合。本法仅需标记一种抗体 直接法 特异性荧光干扰少；缺 （二抗如羊）就可以检测很多 由同一种动物（如兔）制备的 点是一种标记抗体只能 间接法