依据蛋白质组学.ppt

第一讲：蛋白质组学基本原理能柯;第一章 绪论门蜡嗡硬赴铁厌绒;15 February 200;一、蛋白质组研究的开端及蛋白质;5. 基因虽是遗传信息的源头,;Proteome : Prot;Proteomics（蛋白质组;基因微阵列（microarra;2. 蛋白质形成后在稳定性和转;三、蛋白质组学研究的内容① 结;② 功能蛋白质组学： 研究蛋白;四、蛋白质组学对分析的挑战 ;第二，蛋白质不能专一地与互补氨;五、蛋白质组学的工具 四;3）对数据库中特定蛋白质序列与;EST (Expressed ;The identificat;六、蛋白质组学的应用范围 根据;2）蛋白质修饰谱：蛋白质修饰谱;获 得： 阐释重要生命活;第二章 蛋白质组学的基本研究方;Outline一、概述二、蛋白;1、蛋白质组学研究远比基因组学;2、蛋白质组学研究技术进展（1;MALDI-TOF MS: m;3、蛋白质组分析的首要要求将来;生物学问题的提出实验模型的设计;4.蛋白质组研究的基本技术路线;二、蛋白质的提取??样品制备票距;二维电泳分析中的样品制备制备原;样品制备原则1、尽可能采用简单;3、样品裂解液新鲜制备，并且分;（一）细胞裂解的方法赂窄戍剔煎;1、温和裂解的方法： 适用于;2、剧烈的细胞裂解方法 ;3、蛋白酶抑制剂防止蛋白酶裂解;4、蛋白质沉淀步骤（1）硫酸铵;（3）丙酮沉淀 提取物加;5、清除影响二维电泳图谱的杂质;（4）核酸核酸增加样品黏度，导;（6）脂类 脂类易和膜蛋;目的：加入裂解液主要是确保一向;（3）还原剂用于断裂二硫键，常;使用注意点： ① 样品离心前在;三、蛋白质的分离与二维电泳技术;(一) 二维电泳的基本原理 ;1D-SDS一 ;二 1D-SDS;2D-SDS一 两种;二 新式2D-SDS-PAG;三、 2D凝胶分离蛋白质的;五 2D-SDS存;2、二维电泳分辨能力传统的二维;3、二维电泳可提供的数据 二;4、二维电泳结果说明二维电泳得;Cell culturePro;脯静袍吻豢枚跑踩崎棺越琅敛好克;凤抱试诵叶元醒蘑湖唐槽醇触戌恢;欺及形势控疮猪硷仲挥镁前迎价札;四、蛋白质的检测技术搁沦躇窑附;（一）考马氏亮蓝染色 考马;（二）银染1、原理：二维凝胶在;2、特点（1）银染分酸性（ A;(三)负染 1、原理（锌-咪唑;2、特点（1）负染能提高SDS;（四）荧光染色1、原理：利用荧;2、特点（1）灵敏度250pg;二维电泳荧光检测物皖猿移痒砌函;染色方法灵敏度线性范围与质谱兼;五、蛋白质序列测定和生物 质谱;质谱分析法：质谱分析法(mas;蛋白质、多肽质谱是通过电离源将;ESI：electrospra;这两种电离技术可以使核酸或蛋白;Instrumentation;How MS Instrume;What Do We Want;Ion SourcesMatr;MALDISince disc;MALDI : Princip;蔬迭略塞镰保淳五惦泡掣痈彻撇浦;MALDI: Practica;MALDI Spectrum ;ESI: PrincipleA;N2 (80 oC)N2 (8;ESI: Practical ;Typical ESI Spe;Mass AnalyzersT;Objective: Gene;肽质量指纹谱(Peptide ;Peptide Mass Fi;Peptide Mass Fi;750130018502400;Characteristics;The search para;Sequence databa;Peptide Mass Fi;Peptide Mass Fi;Protein Identif;Correlating MS/;Showing sequenc;ComplicationsPr;氨基酸残基相对分子量 (NH-;基于串联质谱的肽序列测定 ;Peptide Sequenc;Fragmentation o;Typical Peptide;蛋白质翻译后修饰的鉴定蛋白质翻;7.1 磷酸化蛋白质的鉴定1;磷酸化蛋白质的检测32P放射性;1.肽序列分析的基本步骤：（1;2.蛋白质测序发展简史（1） ;（5） 对2-D胶上的点进行测;3. 蛋白质C端测序 C端测序;4. 质谱法用于蛋白质顺序测定;5. 蛋白质测序展望（1）N ;凝胶的图像处理分析汕城咽猫霞廖;质谱技术进行蛋白质鉴定的基本流;实验方法完整蛋白质（如凝胶分离;T1T2T4T5T6*Base;2D 電泳 →? Mass 定;六、蛋白质构象解析技术定杯市隧;1. 实际测定具体蛋白质的三维;2. 通过氨基酸序列知识去辨识;思考题1、从已学过的生物化学知