对体外培养子宫肌瘤肌瘤myocosterone作用的形态学观察.docVIP

【摘要】 目的 观察不同浓度米非司酮作用下体外培养的子宫肌瘤细胞的形态学变化，寻找治疗子宫肌瘤的最佳米非司酮浓度。方法 光镜及电镜下观察不同浓度米非司酮(10-8～10-4mol/L)下体外培养的子宫肌瘤细胞的其形态学变化。结果 10-8～10-7mol/L米非司酮对细胞生长无影响，10-6mol/L以上浓度肌瘤细胞萎缩，10-4mol/L抑制作用最强。结论 米非司酮破坏肌瘤细胞结构，干扰核膜、胞膜、细胞器、及染色体，并与米非司酮浓度成正相关。 【关键词】 体外培养;子宫肌瘤细胞;米非司酮;形态学 　【Abstract】 Objective To observe the morphological changes of the human leiomyoma cells cultured in the presence of mifepristone,and to explore the optimal concentration of treating leiomyoma with mifepristone.Methods The morphological changes of the cells were observed under microscope and electron microscope.Results The inhibitory effect of mifepristone on the cells was only expressed when the concentration of mifepristone was relatively high (10-6mol/L),and the cell began to regression.Conclusion Mifepristione may destroy the struture of leiomyoma cells and interfere the membrane of cell and nuclei,organs of cell,chromosome. The inhibitory effect of mifepristone on human leiomyoma cells in vitro is concentrationdependent. 　　【Key words】 culture in vitro;uterine leiomyoma;mifepristone;morphology 　　子宫肌瘤是激素依赖性肿瘤已被公认，抗孕激素制剂米非司酮用于治疗子宫肌瘤已取得一定疗效，但肌瘤缩小程度差异较大，从0%～80%不等[1]，故人们对米非司酮治疗子宫肌瘤机制进行了不同层面的研究。本研究采用子宫肌瘤细胞体外培养法加入不同浓度的米非司酮，用电镜及光镜观察其结构变化，以了解米非司酮缩瘤的机制，并为临床应用米非司酮治疗子宫肌瘤时剂量的选择提供参考依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 标本来源 　　2009年2至6月在天津市第三中心医院手术室行子宫肌瘤剥除及子宫切除17例患者的肌瘤组织，患者年龄40～55岁，并且确认术前3个月未服用过激素类药物。根据月经周期和病理诊断确定子宫内膜分期，且组织学诊断确诊子宫肌瘤，并未发现子宫内膜有病理性改变，其中增生期15例，分泌期2例。 　　1.2 方法 　　1.2.1 子宫肌瘤细胞分离与原代培养:将新鲜的肌瘤组织剪碎成1 mm3小块，5 g组织加入细胞生长液与细胞消化液2∶1的混合液20 ml中消化，过目筛网除去未消化的组织，离心，得到纯化的子宫平滑肌瘤细胞。用0.04%台盼蓝染色行活细胞计数，观察细胞活力约90%，用细胞生长液调整细胞种植浓度为2×105/ml，混匀后接种于24孔培养板中，每孔接种2 ml，置37℃ 5% CO2恒温孵育箱中培养，每2～3天换液1次。 　　1.2.2 米非司酮对肌瘤细胞体外生长的作用:取同批培养成单层生长至融合状态的细胞(5～7 d)，加入米非司酮浓度10-8～10-4 mol/L,每天记录观察细胞的形态及生长情况，并及时照相。每组均设对照，对照组加入等体积无水乙醇。 　　1.2.3 米非司酮作用后的肌瘤细胞的超微结构：用1∶1的2% 乙二胺四乙酸二钠(EDTA)及0.05%的胰蛋白酶2 ml加入培养3 d细胞的孔板中消化，离心制成细胞团， 2.5%戊二醛固定，PBS液漂洗，10%四氧化锇后固定，乙醇逐级脱水，Epon812环氧树脂包埋。LKBNOVE型超薄切片机切片，厚度为50～70 nm，经醋酸铀和柠檬酸铅染色后，JEOL1010透射电镜观察。 　　2 结果 　　2.1 米非司酮对体外培养的子宫肌瘤细胞作用的光镜下形态 　　体外培养生长良好的子宫肌瘤细胞