5电泳技术和常用电泳仪探究.ppt

第四节 毛细管电泳的基本结构和分离模式 （四）毛细管等电聚焦电泳 不同等电点的分子分别聚集在不同的位置上，不作迁移而彼此分离，这就是等电聚焦分离过程。毛细管的等电聚焦是在毛细管内实现的等电聚焦过程，具有极高的分辨率，通常可以分离等电点差异小于 0.01pH单位的两种蛋白质，例如肽类、蛋白质的分离。 第四节 毛细管电泳的基本结构和分离模式 （五）毛细管等速电泳 毛细管内首先导入具有比被分离各组分高电泳淌度的前导电解质，然后进样，随后再导入比各分离组份低电泳淌度的尾随电解质，在强电场的作用下，各被分离组分在前导电解质与尾随电解质之间的空隙中发生分离。 第四节 毛细管电泳的基本结构和分离模式 （六）毛细管电色谱 它包含了电泳和色谱两种机制，是在毛细管中填充 或在毛细管壁 上键合（或涂壁）固 定相，从而构成毛细 管色谱柱，依靠电渗 流推动流动相，携带 样品迁移，根据样品 分子的质荷比、分子 尺寸及分配系数的差 别而分离。 06-13 CEC-加压毛细管电色谱仪 第四节 毛细管电泳的基本结构和分离模式 五、毛细管电泳仪的基本结构 毛细管电泳仪的结构并不复杂，主要有高压源、毛细管柱、检测器，以及两 个供毛细管两端插入而又可 和电源相连的缓冲液槽。 （一）毛细管柱 （二）检测器 （三）毛细管电泳 法的进样技术 06-14毛细管电泳仪 第四节 毛细管电泳的基本结构和分离模式 六、常用各种电泳仪简介 （一）稳压稳流电泳仪 稳压稳流电泳仪是中压电泳仪。其输出电压的调节范围为0V～600V、输出电流为0mA～100mA。该机工作稳定性好、调节范围宽，并设有完善的短路保护电路和过流保护电路，是目前国内中、低压电泳实验中应用最广泛的电泳仪之一。 06-15 稳压稳流电泳仪 第四节 毛细管电泳的基本结构和分离模式 （二）全自动醋纤膜电泳仪 全自动醋纤膜电泳仪为全自动电泳仪，有可见光单系统，使用醋酸纤维薄膜电泳片，优点为自动化程度高。只需将样品、试剂、电泳片放好，人员可离机完成实验并得到结果。 第四节 毛细管电泳的基本结构和分离模式 （三）全自动荧光/可见光双系统电泳仪 全自动荧光/可见光双系统电泳仪为全自动电泳仪，具有荧光/可见光双系统，在使用荧光试剂项目如CK、LD同工酶时为全自动。只需将样品、试剂、琼脂糖凝胶电泳胶片放好后，操作人员可离机完成实验并得到结果。 第四节 毛细管电泳的基本结构和分离模式 （四）全自动琼脂糖电泳仪 全自动电泳仪，有可见光单系统，使用琼脂糖凝胶电泳胶片，优点为灵敏度高，可适用于低浓度蛋白检验 。该仪器自动化程度较差，当电泳结束和染色脱色完成后，工作人员必须将电泳片由机器中取出。 第四节 毛细管电泳的基本结构和分离模式 （五）双向电泳及双向电泳-液相色谱-质谱联用 双向电泳是将样品进行电泳后，在它的直角方向再进行一次电泳。双向电泳第一向为等电聚焦，第二向为梯度SDS电泳。样品经过电荷与质量两次分离后可得到分子的等电点、分子量等信息。这是目前所有电泳技术中分辨率最高，信息量最多的技术，已成为分析复杂蛋白混合物的基本工具。 第四节 毛细管电泳的基本结构和分离模式 （六）高效毛细管电泳及高效毛细管电泳-质谱联用 高效毛细管电泳是以弹性石英毛细管为分离通道，以高压直流电场为推动力，依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离的电泳分离分析方法。高效毛细管电泳是一种迅速发展的分离技术，仪器简单、操作简便、分析速度快、分离效率高、操作模式多、开发分析方法容易、实验成本低、消耗少、应用范围极广。 第四节 毛细管电泳的基本结构和分离模式 （七）毛细管电泳芯片 利用毛细管电泳芯片可以进行DNA长度分析、序列分析和基因分型等研究。是利用芯片分离荧光标记的寡核苷酸，整个分离过程在45s之内，而芯片的长度仅为3.8cm。因为其可承载高电压（2300V/cm）并具有较小的样品体积，故有利于得到较好的分离效果。 第四节 毛细管电泳的基本结构和分离模式 （八）DNA测序系统 该系统利用凝胶毛细管的原理，将多道毛细管阵列设计，用四种不同的荧光染色标记4种核苷酸，在模板上合成DNA单链，然后在DNA外切酶的作用下进行碱基的连续水解和释放，用激光识别和记录释放的碱基。 06-16 DNA测序系统 第五节 电泳仪的临床应用 一、 血清蛋白电泳