5微生物的生长繁殖与生存因子探究.ppt

二、显微镜和显微技术 决定显微观察效果重要因素：分辨率和 反差 分辨率：辨别两点之间最小距离的能力 反差：样品与背景区别程度 普通显微镜 机械装置：镜座、支架、载物台、 调焦螺旋 光学系统：物镜、目镜、聚光器 普通显微镜结构示意图 显微镜种类和原理： 二、显微镜和显微技术 光学显微镜一般配置的最大放大倍数是多少？为什么？ 目镜：10 ~ 15 ╳；物镜： 100 ╳；总放大倍数1000~1500 ╳； 如何实现光学显微镜一般配置的最大放大倍数？其原理？ 使用油镜，即在100 ╳物镜和载玻片之间滴加香柏油； 香柏油与玻璃折射率相近 二、显微镜和显微技术 0.5 l 分辨率（最小可分辨距离）= ———— n sin q 分辨率与所用波长成反比！ 二、显微镜和显微技术 分辨率与所用波长成反比！ N：玻片与物镜间介质的折射率 空气（n=1.0）、水（n=1.33）、香柏油（n=1.52） 显微观察时可根据物镜的特性而选用不同的介质 二、显微镜和显微技术 二、显微镜和显微技术 光线在穿过折射率不同的介质时发生折射 二、显微镜和显微技术 浸没油与玻璃的折射率相近 很多原来由于在透镜及载片表面的反射和折射而损失的 光线可以进入物镜，使照明亮度提高，改善观察效果。 暗视野显微镜 二、显微镜和显微技术 活细菌在普通显微镜下是透明，观察不清，采用暗视野显微镜，如：黑夜看星星就很清楚。 暗视野显微镜结构与照明示意图 暗视野显微镜 二、显微镜和显微技术 特殊聚光器实现斜射照明，给样品照明的光线不直接穿过物镜，而经样品反射或折射后进入物镜，使样品与背景差别大，可以清楚看到透明微小颗粒。用于：生活细菌运动性观察。 相差显微镜 二、显微镜和显微技术 相差显微镜 二、显微镜和显微技术 光线透过透明标本，波长（颜色）和振幅（亮度）没有多大变化，用普通显微镜观察透明标本，其形态和内部结构难以分辨。细胞各部分折射率和厚度不同，当光线通过时，直射光和衍射光光程有差别，而人眼看不到，但是可通过相差显微镜看到。 相差显微镜采用特殊光学装置：环状光阑和相差板，利用光的干涉，将光的相位差转变为人眼可见的振幅差（明暗），使能不染色而看到活细胞及细胞内的某些显微结构。其发明人F.Zernike因此获1953年诺贝尔物理奖。 荧光显微镜 二、显微镜和显微技术 荧光素吸收uv放出波长较长的可见光，因此在uv照射下，发荧光的物体会在黑暗背景显现为光亮有色物体，为荧光显微技术原理。在免疫学和分子生物学应用广泛。 二、显微镜和显微技术 荧光显微镜 二、显微镜和显微技术 透射电子显微镜（简写TEM） 用波长短的电磁波取代可见光，使分辨率提高。 工作原理类似，因光源不同，有区别: 电子若遇空气中分子会发生偏转使物象不清楚，因此镜筒高真空 2)电子带电荷，电镜是用电磁圈使之聚焦 3)电子像人眼看不到，用荧光屏显示或感光胶片记录 大肠杆菌 透射电子显微镜图 扫描电子显微镜（SEM） 扫描电子显微镜 大肠杆菌扫描电镜图 二、显微镜和显微技术 工作原理与光学显微镜和透射电子显微镜不同，是电子束扫描，激发样品表面放出二次电子，电子产生多少与标本表面立体形貌有关。电子经探测器收集，经光电倍增管和放大器，产生样品立体图像于荧光屏上。 主要用于：样品表面结构 扫描隧道显微镜（STM） 二、显微镜和显微技术 80年代出现的，原理：利用量子力学中的隧道效应。 其横向分辨率：0.1～0.2nm，纵向分辨率：0.001nm 这种分辨率足以对单个原子观察。 利用这种显微镜直接观察蛋白质、DNA、RNA等以及CM、virus等结构。 厨房抹布上的细菌和霉菌 棉纤维上的汗垢 扫描隧道显微镜下的DNA 显微样品制备 二、显微镜和显微技术 样品好坏直接影响观察结果。 考虑因素：根据所用显微镜特点采用合适制样方法，尽可能使样品生理结构稳定，采用各种方法提高反差。 二、显微镜和显微技术 显微样品制备之 光学显微镜制样 光学显微镜制样 活体观察 染色 压滴法 悬滴法 菌丝埋片法 活菌 死菌 美蓝染色 简单染色 鉴别染色 革兰氏染色、鞭毛染色、芽孢染色 二、显微镜和显微技术 特点：避免染色对细胞结构的破坏，用于运动性、摄食特性、生长繁殖过程中形态变化等观察 压滴法：菌悬液滴载玻片，加盖玻片直接观察 悬滴法：盖玻片滴一滴菌悬液，反转置于特制凹载玻片直接