HBV携带者肝细胞体外培养的研究.pdfVIP

· 812 · 生 望堂 痘盘查 年第22卷第儿期 ● 论 著 HBV携带者肝细胞体外培养的研究 王爱华 ，江渊 ，邵丽华 ，王刚 ，陈丰哲 ，张秀美 ，马立宪 [摘要] 目的：体外培养 HBV携带者人原代肝细胞 ，研究细胞 内HBV的复制情况及持续时间，为临床抗病毒试验 治疗奠定基础 。方法：分离HBV携带者人原代肝细胞进行体外培养。14d后 ，测绘细胞的生长曲线和细胞核型分析。 分别用巢式PCR和ELISA法对细胞匀浆及培养上清液进行HBV-DNA和HBsAg、HBeAg的检测。结果：HBV携带者 人原代肝细胞和培养上清液可检测到HBV—rcDNA，培养上清液 内检测到HBsAg和HBeAg。细胞培养3周时开始出现 大量死亡。结论 ：该细胞体外培养期间仍能保持对 HBV感染和复制的特性，为体外研究HBV感染情况奠定了基础 。 [关键词] 人原代肝细胞；体外培养；HepG2细胞；感染 中图分类号 ：RS1 文献标识码 ：A 文章编号 2008)11812—03 Studyon hepatitisB virus replication in human pri~hary hepaticcellwith hepatitisB virusin vitro WANGAihua，JIANG Yuan，SHAOLihua，eta1．DepartmentofInfectiousDiseases。QiluHospital。 ShandongUniversity，Jinan250012，China ~Abstract]ObjectiveToresearchthesurvivinofhepatitisB viruscarriedinhumanprimary hepatocytesinvitroandthelastingofthecells．MethodsThehumanprimaryhepaticcellscarrying hepatitisB viruswereisolatedinvitro．After14days，supernatesandcellsofculturewereexamined forHBV—DNA，HBsAgand HBeAg by PCR andELISA respectively．ResultsHBV rcDNA was detectedinsupernatesandcells．HBsAgandHBeAgweredetectedinsupernates．After3weeks，a greatsmountofcellsbegandying．ConclusionThehuman primaryhepaticcellscarryinghepatitisB viruskeepthecharactersofinfectionandreplicationofhepatitisB virusduring cultureinvitro ． The findingsmaymakefoundationsforstudyinghepatitisB virusinfectioninvitro． Keywords)Humanprimaryhepaticcell；cultureinvitro；HepG2cells；infection 乙型肝炎病毒 (hepatitisBvirus，HBV)感染机制 表达 ，探讨 HBV感染情况和细胞培养持续时间，期望 的研究是传染病研究领域 的一个热点。但 由于 HBV 能为临床抗病毒试验治疗提供一个实验平台。 黏附以及DNA转录和复制存在较严格 的宿主 (灵长 1 资料与方法 类)和细胞 (肝细胞)特异性口]，局限了体外对 HBV感 1．1 一般资料 人肝脏组织 由本 院普外科提供 ， 染的研究。HBV基 因可以借助于重组的质粒或病毒 D