PCR-微流芯片法检测HBV感染者外周血HBV cccDNA和HBV DNA.pdfVIP

交通医学2oo8年第 22卷第 5期 MedJofCommunications。2008．Vo1．22．No．5 · 477· · 论著与经验交流 · [文章编号]1006—2440(2008)05—0477—03 · 内 科 · PCR一微流芯片法检测HBV感染者外周血 HBVcccDNA和 HBVDNA 凌勇武 王世蓬 罗文明 吴月平 刘先进 黄松平 章幼奕 (南通市第三人民医院传染科，江苏226006) 摘 要 目的：探讨 HBV感染的肝病患者血 中HBVcccDNA、HBVDNA的临床意义。方法：采用PCR一微流 芯片法检测 105例 HBV感染者血清 HBVDNA、HBVcccDNA、白细胞中HBVcccDNA(3例进行肝组织 HBVCC— cDNA检测)，以6例非乙型肝炎患者作为对照。结果：6例非乙型肝炎患者HBVM、HBVDNA、HBVcccDNA均阴 性 ；HBV感染者中41．9％(44／105)白细胞 HBVcccDNA阳性，其中2例阳性PCR产物经基因测序得到验证；HBV DNA≥l(Pcopym／l中HBVcccDNA阳性率 57．4％(35／61)显著高于HBVDNAIOcopy／ml者 20．5％(94／4，P0．01)； 18．9％HBVDNA103copym／lHBV感染者 HBVcccDNA阳性 ：抗病毒治疗 的慢性肝病患者 HBVcccDNA 阳性率显 著低于未抗病毒治疗者 (5／25VS346／5，P0．01)。结论 ：HBV感染的患者外周血 中存在 HBVcccDNA；HBVDNA 高浓度者HBVcccDNA检出率高 ；外周血 白细胞HBVcccDNA、血清HBVDNA联合检测更能准确判断抗病毒治 疗效果及提高 HBV复制检出率。 关键词 PCR一微流芯片；HBVcccDNA；HBVDNA；乙型肝炎；抗病毒 中图分类号 R512．6+2 文献标识码 B HBV感染的肝细胞核 内可检测到共价 闭合环 项指标。 状 DNA(HBVcccDNA)，它是评价 HBV感染状态及 1．2 检测方法 血清HBV—DNA含量检测采用竞 药物疗效最主要的依据 ，但取材困难，临床上难 以普 争PCR一微流芯片法试剂(上海浩源公司)，白细胞 中 遍开展 。乙肝患者外周血单个核细胞 中是否存在 HBVcccDNA检测采用 PCR一微流芯片法试剂 (上海 cccDNA有争议[121，而血清HBVDNA不能完全真实 浩源公 司)，血清 中HBVcccDNA检测采用荧光 反映肝组织内HBV感染及复制情况，尤其在血清 PCR法试剂 (上海复星长征)，HBVcccDNA阳性扩 HBVDNA低于检测水平时，肝组织 HBVDNA仍可 增产物采取直接测序鉴定，与GeneBank中已知序列 维持一定水平 ，即肝 内仍有 HBV复制[31。本文采用 进行 同源性 比较 。HBVM检测采用 ELISA法或 PCR一微流芯片技术检测 HBV感染者外周血 HBV mEIA法 ，试剂 (上海科华公司、美国雅培公司)。 cccDNA，尝试把外周血 白细胞 中HBVcccDNA作为 1-3 主要 仪 器 PE9600型基 因扩增 仪 ，Caliper 一 种抗病毒治疗效果判断的新指标，报告如下。 1000微流芯片仪，AXSYM化学发光仪，LightCycler 荧光 PCR仪 ，13立 7170A全 自动生化仪 ，ABI 1 资料和方法 PRISM310型核苷酸序列分析仪 ，科华Labsystems 1．1 一般资料 3例HBV携带者、3例急性乙型肝