流式微球载体技术在检测肾综合征出血热患者血清特异.docVIP

　　流式微球载体技术在检测肾综合征出血热患者血清特异 【摘要】 　　目的: 建立流式微球载体技术（FMA）检测肾综合征出血热（HFRS）患者血清抗HFRS 病毒特异性抗体IgM和IgG及细胞因子含量的新方法。方法: 选择28例临床确诊的HFRS患者及20例健康人血清标本, FMA定量检测抗HFRS 病毒IgM和IgG; 定量检测细胞因子IL6和TNFα。检测结果与ELISA法进行比较。结果: FMA检测HFRS患者抗HFRS病毒IgM和IgG的阳性率分别为92.85%和71.43%, 健康对照组的抗体阳性率（假阳性率）为0; HFRS患者血清IL6和TNFα的含量分别为(532.62±397.19) ng/L和(392.68±177.68) ng/L, 明显高于健康对照组（38.77±20.32）ng/L（Plt;0.01）和(15.91±6.91) ng/L（Plt;0.01）。ELISA法检测HFRS患者抗HFRS病毒IgM和IgG的阳性率分别为71.43% 和50.00%, 健康对照组的抗体阳性率（假阳性率）为0; HFRS患者血清IL6和TNFα的含量分别为(256.46±102.51) ng/L和(45.63±5.32) ng/L, 高于健康对照组(53.8±19.21) ng/L（Plt;0.01）和(5.81±3.58) ng/L（Plt;0.01）。结论: 建立了FMA法对HFRS患者的特异性抗体和IL6和TNFα的检测, 其灵敏度明显优于ELISA法, 为HFRS的临床诊断和病理机制研究提供了新的方法。 【关键词】 肾综合征出血热; IL6; TNFα; 流式细胞术; 免疫酶技术 　　［Abstract］AIM: To establish a floicrobeads assay (FMA) to examine the level of hemorrhagic fever e virus (HFRS V.) specific IgM, IgG and cytokines in HFRS patients. METHODS: Serum samples from 28 cases of HFRS and 20 healthy controls levels of antiHFRS V. antibodies matory cytokines IL6 and TNFα level of IL6 and TNFα in HFRS group level of IL6 and TNFα in HFRS group ethod is established to monitor the immune response in HFRS patients, orrhagic fever e; IL6; TNFα; Floetry; immunoenzyme technology 　　肾综合征出血热（hemorrhagic fever e, HFRS）是由HFRS病毒引起的自然疫源性急性病毒性传染病。临床上, 检测特异性IgM、 IgG和细胞因子的方法仍以ELISA法为主, 该技术是以包被在酶板上的抗原(或抗体)与标本中的抗体（或抗原）反应, 形成抗原抗体复合物, 再用酶标二抗和酶底物显色, 通过酶标仪检测。该方法的灵敏度存在缺陷, 并且是一种非均相法检测, 必需将未结合的抗体和酶标二抗分离出去后才能进行读数, 因而增加了操作时间、 操作步骤和系统误差。 　　流式微球载体技术 (floicrobeads assay, FMA) 是利用流式细胞术（FCM）和高聚分子微球载体技术检测可溶性生物分子的新技术。原理是在聚苯乙烯微球上进行抗原抗体反应, 用荧光物质标记的二抗为示踪剂, 通过流式细胞仪进行检测。该方法灵敏度高, 可作均相法分析, 减少了操作步骤和时间。我们采用FMA检测HFRS患者血清中特异性IgM、 IgG及细胞因子含量, 并与ELISA方法进行了比较。 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 　　陕西省疾病预防控制中心病毒研究室提供的HFRS患者血清28例, 其中男18例, 女10例, 年龄17～52岁, 平均年龄30.6岁。FACSCalibur流式细胞仪、荧光校准微球（FloA 试剂盒由比利时鲁汶大学医学院馈赠。HFRS病毒抗体定性检测试剂盒主要成分包括: 基因工程重组汉滩病毒抗原包被聚苯乙烯微球, 荧光素（FITC）标记羊抗人IgM和IgG, 阴性对照血清和阳性对照血清。人IL6和TNFα试剂盒主要成分包括: 鼠抗人IL6或TNFα抗体包被聚苯乙烯微球, 荧光素（FITC）标记鼠抗人IL6和TNFα抗体, 不同浓度梯度的IL6和TNFα标准品。肾综合征出血热病毒 IgM、 IgG检测试剂盒购