猪胎儿卵母细胞发生早期的细胞凋亡变化-华中农业大学学报.PDF

第 29 卷 第 1 期 华 　中　农 　业 　大 　学 　学 　报 Vol . 29 　No . 1 20 10 年 　2 月 Journal of Huazhong A gricult ural U niver sit y Feb . 20 10 ,7 1～74 猪胎儿卵母细胞发生早期的细胞凋亡变化 1 1 2 1 1 1 1 霍道坦 　陶　勇 　王 　勇 　权 　青 　田宁宁 　成志军 　章孝荣 1. 安徽农业大学动物科技学院 ,合肥 230036 ; 2 . 安徽安泰农业开发有限责任公司 ,宣城 242200 摘要 　为研究猪卵母细胞发生早期卵巢上细胞的凋亡情况 ,制作妊娠 33 、40 、46 、54 、6 1 d 母猪胎儿卵巢的 石蜡切片 ,并进行荧光染色 。结果发现 ,母猪妊娠到 33 d 时 ,胎猪卵巢上即可见原始生殖细胞和卵原细胞的凋 亡 ,随着妊娠时间的延长 ,凋亡也逐渐增加 ,妊娠 33 、40 、46 、54 和 6 1 d 母猪胎儿卵巢上卵原细胞的凋亡率分别为 3 . 13 % 、4 . 32 % 、5 . 50 % 、9 . 43 %和 11. 10 % , 同时 , 颗粒细胞 的凋亡率则分别为8. 89 % 、12 . 45 % 、14 . 74 % 、 17 . 96 %和 22 . 81 % 。结果说明 ,在猪胎儿卵母细胞发生早期 ,即开始发生了卵原细胞和颗粒细胞的凋亡 ,且有逐 渐增加的趋势 。 关键词 　胎儿 ; 猪 ; 卵巢 ; 卵原细胞 ; 凋亡 ( ) 中图法分类号 　Q 954 . 4 　　文献标识码 　A 　　文章编号 　1000242 1 20 10 0 1007 104 　　卵母细胞的发生是胚胎发育过程中的重要生理 聚甲醛 4 ℃固定过夜 ,梯度乙醇中脱水 ,用二甲苯作 事件 。卵母细胞发生时 ,即使是在生理条件下 ,也不 透明处理 , 再浸蜡包埋 。用组织切片机切成 3 ～ μ ( 是所有卵原细胞都发育到减数分裂阶段 ,绝大部分 5 m厚的石蜡切片 连续切片 ,分别进行组织学和 ) 经凋亡后闭锁退化 。就是那些启动减数分裂的卵母 荧光染色 ,37 ℃恒温箱放置 24 h ,4 ℃保存 。 ( 　卵巢切片的组织学染色 细胞 ,也有相 当数量在发育着 的卵泡 中凋亡 闭 锁) [ 1 ] 。经典理论认为[2 ] ,大多数哺乳动物的卵原细 将石蜡切片脱蜡复水后 ,苏木精伊红染色 ,显微 胞经大量增殖后 ,在胎儿出生前后便停止增殖 ,即不 镜下观察拍照 。 再能产生新的卵原细胞 ,而是数量一直减少 。母猪 　卵巢切片荧光染色 妊娠后 1 至 2 个月是雌性胎儿卵母细胞发生的关键 将石蜡切片脱蜡复水后 ,用 PB S 洗 2 遍 ,每次 时期 ,为阐明在卵母细胞发生中细胞凋亡情况及变 3 min ,吸尽液体 ;加入 Hoech st 33258 染色液 ,染色 化特点 ,笔者以猪胎儿为研究对象 ,测定猪卵巢发生 5 min ;去染色液 ,用 PB S 洗 2 遍 ,每次 3 min , 吸尽 过程中卵原细胞的凋亡情况 , 以期为认识和利用卵 液体 ;滴 1 滴抗淬灭封片液