第四章毛细管电泳法.PDF

毛细管电泳法 姚彤炜 主讲 1 概述 • 毛细管电泳又叫高效毛细管电泳(High Performance Capillary Electrophoresis, HPCE)， 是80年代初发展起来的一种新型分离分析技术， 它是电泳技术与层析技术相结合的产物 • 广泛用于生物大分子，手性药物，生物体内的药物 及代谢物，中西药物及其制剂等的分析，在选择性 上与高效液相法有很大的互补性 • 被多国药典收载，如2010年版中国药典对盐酸头 孢吡肟中N-甲基吡咯烷的检查，USP对盐酸罗哌卡 因的对映体纯度检查，均采用毛细管电泳法测定 2 一、基本原理 • 高效毛细管电泳以高压电场为驱动力，以毛细 管为分离通道，依据各组分之间的迁移速度和 分配行为上的差异而实现分离的一类液相分离 技术 • 在毛细管电泳中有两个重要的迁移： –电泳迁移 –电渗流迁移 3 •电泳迁移 •在电场作用下，带电组分作定向移动。 其迁移速度（ν ）可用下式表示： ν = µ E （1） e – µ 为电泳淌度 e – E为电场强度（V/L）——是外加电压 和毛细管长度的函数 4 •电泳迁移原理 •对于给定的离子和介质，淌度µ 为离子的 e 特征常数，其大小取决于分子所受的电场 力F 和其通过介质时的摩擦力F 的平衡： E F F = qE （q为离子电量） E F = －6πηrν F （η 溶液粘度, r 离子半径, ν 离子速度） •达到平衡时，两种力大小相等而方向相反， 即 qE=6πηrν （2） 5 •电泳迁移原理 •根据式（1），淌度 µ = ν/E e •根据式（2），ν/E = q/(6 πηr) •所以 µe= q/(6 πηr ) （3） •式（3）表明，带电量大的物质，离子半 径小的物质有较高的淌度 6 •淌度 •淌度——物理常数，是在溶质带最大电 量时测定并外推至无限稀释