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上海交通大学硕士研究生学位论文 体内研究IL-2基因瘤苗抗肿瘤效应 及安全性检测 The study about ANTI-TUMOR EFFECT AND SAFETY OF IL-2 GENE VACCINE IN VIVO 海 研究生姓名：张某某医学院附属瑞金医院普外科 指导老师：赵老师 学科（专业）：外科学（普通外科学） 培养单位：上海交通大学医学院附属瑞金医院 攻读学位：硕士学位 答辩时间：2008年5月 上海交通大学 学位论文原创性申明 本人郑重申明:所成交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 上海交通大学 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关的数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 保密 （ ）， 在 年解密后适用本授权书。 本学位论文属于 不保密（ ）。 （请在以上括号内打“√” 学位论文作者签名： 指导教师签名： 日期： 年 月 日 日期： 年 月 日 目录 中文摘要 1 英文摘要 3 引言 6 1 试验材料 9 1.1 细胞株 9 1.2 细胞培养 9 1.3 杂交试验 9 1.4 动物模型 9 1.5 免疫组化 9 2 试验方法 10 2.1 细胞培养 10 2.2 大肠癌基因瘤苗生物活性的鉴定 10 2.3 瘤苗安全性的检测 10 2.4 体内实验检测基因瘤苗的抗肿瘤效应。 11 3 结果 13 3.1 ELISA检测IL-2蛋白水平得表达 13 3.2 瘤苗细胞的安全性检测结果 13 3.3 体内实验研究瘤苗的抗肿瘤效应 15 4 讨 论 20 5 结论 24 参考文献 25 综述 26 致谢 32 发表论文情况 33 中文摘要 体内研究IL-2基因瘤苗抗肿瘤效应 及其安全性检测 摘 要 目的:本课题研究转导白细胞介素-2（IL-2）基因的人大肠癌细胞瘤苗的抗肿瘤效应及其安全性检测。 方法：结肠癌细胞株COLO205采用脂质体法稳定转染IL-2基因， 应用ELISA法检测瘤苗的IL-2的表达，筛选高表达IL-2基因的细胞克隆作为基因瘤苗。将已构造好的结肠癌裸鼠模型分为两组，采用瘤体内注射的方法，注射经60Gy60Co照射的瘤苗细胞（治疗组）和PBS缓冲液（对照组）,密切观察肿瘤生长状况，五周后处死所有裸鼠，取出肿瘤，观察并称重，免疫组化法检测IL-2 基因的表达。把已制备好的大肠癌基因瘤苗用60Co进行照射，将照射瘤苗细胞继续培养，用苔盼蓝染色法测定细胞的存活率，将照射的瘤苗细胞和未照射组的瘤苗进行荷瘤试验。 结果: 获得基因瘤苗最高表达为COLO205-H5量为139.13 ng/1×107/24h。瘤体内注射瘤苗组的裸鼠肿瘤生长缓慢，较早达到平台期，而对照组的肿瘤生长迅速，差异有显著性。（ t=2.7,p0.05）治疗组肿块的重量也明显小于对照组（t=7.2，p0.01）。移植瘤治疗组IL-2免疫组化结果显示阳性，而对照组为阴性,说明了瘤苗在移植瘤体内存活并分泌IL-2。照射60Gy60Co瘤苗细胞培养在25天内全部死亡，荷瘤试验显示照射后的瘤苗未能成瘤，而未经照射组均已成瘤。 结论:通过体内实验研究证实了IL-2基因转导结肠癌细胞制备的瘤苗具有一定的抗肿瘤效应，经60Gy60Co照射后能消除其致瘤性，为肿瘤的治疗提供了一定的实验基础。 关键词:大肠癌,白细胞介素-2,基因瘤苗，移植瘤 英文摘要 The study about ANTI-TUMOR EFFECT AND SAFETY OF IL-2 GENE VACCINE IN VIVO ABSTRACT Objective: To investigate the anti-tumor effect of IL-2 gene vaccine and detect its safety. Methods: Eukaryotic expression vectors containing human IL-