大肠杆菌er2566 表达的重组thanatin 的敏感抗菌活性.pdf

窑1050窑 南方医科大学学报(JSouthMedUniv) 2010;30(5) 大肠杆菌ER2566 表达的重组Thanatin 的敏感抗菌活性 1 1 2 1 1 2 王沛珍 袁顾金保 袁罗军 袁彭鸿娟 渊南方医科大学公共卫生与热带医学学院 病原生物学系袁 微生物学系袁广 东广州510515 冤 摘要院目的 原核表达抗菌肽袁纯化并鉴定其抗菌活性遥方法用人工合成的方法合成编码thanatin21 肽的DN 序列渊并 使用了大肠杆菌的偏爱密码子冤袁克隆入pTYB11 质粒袁转化大肠杆菌ER2566遥thanatin 与内含肽融合表达袁内含肽是一 种具有自剪切功能能够自动将目标蛋白及内含肽分离的蛋白剪切元素遥 内含肽-thanatin 以可溶性蛋白的方式表达袁存 在于细胞裂解液的水相中袁将细胞裂解液过几丁质亲和层析柱袁内含肽-thanatin能够特异地结合到几丁质柱上遥在层析 柱上用DTT/半胱氨酸缓冲液在4 益切割过夜袁切割下来的thanatin 用洗脱液洗脱遥 结果在最先洗脱下来的4ml洗脱 液中蛋白浓度达到245 滋g/ml遥 纯化后的thanatin 具有很好的抗革兰氏阴性菌以及真菌的能力袁 如弗氏志贺菌 渊Shigellaflexneri冤尧肺炎克雷伯氏菌渊Klebsiellapneumoniae冤尧宋内志贺菌渊Shigellasnnei冤尧大肠杆菌O157 渊Escherichia coliO157冤尧产毒大肠杆菌渊toxinproducingEscherichiacoli 冤尧绿脓杆菌渊Pseudomonasaeruginosa冤尧白色念珠菌渊Candida albicans冤袁尤其在抗耐药菌方面表现出显著优势袁如耐药肺炎克雷伯氏菌渊Klebsiellapneumoniae冤及产超广谱 茁内酰胺 酶渊Extended-Spectrum 茁-Lactamases 袁ESBLs冤大肠杆菌遥 重组Thanatin对80株产ESBLs 耐药大肠杆菌及30株敏感 的大肠杆菌所产生的抑菌圈的大小没有显著性差异(P0.05,t-test)袁具有相同的抗菌能力遥结论在大肠杆菌ER2566 中 表达的thanatin对革兰氏阴性菌尤其是临床耐药菌有很好的抗菌活性袁克服了抗生素耐药性的问题遥Thanatin具有开发 成抗革兰氏阴性菌药物的潜力遥 关键词院Thanatin曰原核表达曰抗菌活性 中图分类号院Q78 文献标识码院 文章编号院1673-4254渊2010冤05-1050-05 AntibacterialactivityofrecombinantthanatinexpressedbyE.coli ER2566 1 1 2 1 WANGPei-zhen ,GUJin-bao,LUOJun,PENGHong-juan 1 2 DepartmentofEtio-Biology, DepartmentofMicrobiology,SchoolofPublicHealthandTropicalMedicine,SouthernMedicalUniversity, Guangzhou510515,China Abstract: Objective Toexpressantibacterialpeptidethanatinintheprokaryoticexpressionsystemandtestitsantibacterial activity.MethodsTheDNAsequencecodingforthe21peptidesofthanatinwassynthesizedusingthepreferredgeneticcodes ofE.coli,clonedintopTYB11plasmid,andtransformedintoE.coli ER2566.Theexpressio