60 co￣γ 射线辐照诱变筛选纳豆激酶高活耐热菌株 - 铁道工程学报.pdf

７８２ 核 农 学 报　 ２０１３ꎬ２７(６):０７８２~０７８５ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ＮｕｃｌｅａｒＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ 文章编号:１０００￣８５５１(２０１３)６￣０７８２￣０４ ６０ Ｃｏ￣γ射线辐照诱变筛选纳豆激酶高活耐热菌株 １ １ １ ２ ３ ４ 李淑英　 聂　 莹　 杜　 欢　 赵仲麟 　 马　 鑫　 李　 燕　 唐选明 １ ２ ( 中国农业科学院农产品加工研究所ꎬ北京　 １００１９３ꎻ 河南农业大学理学院ꎬ ３ 河南 郑州　 ４５０００２ꎻ 中国农业科学院信息研究所ꎬ北京　 １０００８１ꎻ ４郑州轻工业学院食品与生物工程学院ꎬ河南 郑州　 ４５０００２) ６０ 摘　 要:为得到高活热稳定性的纳豆激酶生产菌ꎬ本研究采用 Ｃｏ￣γ射线辐照诱变纳豆激酶生产菌ꎬ以酪 蛋白平板法作为活性筛选方法ꎮ 经过辐照剂量筛选确认８００ Ｇｙ 为最适诱变剂量ꎬ在该剂量下正突变率 最大ꎬ高达４５％ꎮ 经过８００ Ｇｙ诱变共得到６０株活性提高的菌株ꎮ 不同温度热处理后ꎬ１１株菌在６５℃ 显示了很好的热稳定性ꎮ 关键词:纳豆激酶ꎻ枯草芽孢杆菌ꎻ高活性ꎻ热稳定性 ６０ 　 　 血栓疾病严重危害人类的身体健康ꎬ其发病率和 　 　 Ｃｏ￣γ射线是一种高能电磁波ꎬ其产生的电离作 死亡率居各种疾病之首ꎬ随着血栓危害性增大ꎬ溶栓药 用可以直接或间接改变ＤＮＡ结构ꎬ是微生物育种的常 [１０] ６０ 物的研究成为当今的热点ꎮ 纳豆激酶(Ｎａｔｔｏｋｉｎａｓｅꎬ 用方法ꎮ 费笛波等 通过 Ｃｏ￣γ 射线辐照诱变芽孢 ＮＫ)是由枯草芽孢杆菌分泌的高效纤维蛋白溶解酶ꎬ 杆菌使其产β－葡聚糖酶活力比出发菌株提高３０％以 [１] ６０ 最早发现于传统的日本大豆发酵产品—纳豆 ꎮ 纳 上ꎮ 本研究通过 Ｃｏ￣γ射线对实验室保存的纳豆激酶 豆激酶属于碱性丝氨酸蛋白酶ꎬ可以直接溶解交联状 生产菌进行选育ꎬ以期从基因水平上改变纳豆激酶的 的血栓块ꎬ催化体内血纤维蛋白溶酶原转化为血纤维 结构ꎬ得到活性和热稳定性提高的纳豆激酶突变株ꎮ 蛋白溶酶ꎬ增加血栓溶解因子的合成ꎬ失活纤维蛋白溶 解抑制剂[２－５]ꎮ 与血栓临床溶栓药物相比ꎬ纳豆激酶 １　 材料与方法 具有ｐＨ值和温度稳定性ꎬ在胃肠道中可稳定存在ꎬ具 [６] 有可以口服、高效、半衰期长、价格低廉等优点 ꎮ １１　 材料 通过菌种选