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第八章 色谱法导论 一、色谱法概述 色谱法的发展 色谱法的分类 色谱法的特点 色谱法的发展 色谱法分类 按流动相和固定相所处状态分 按固定相的固定形式分 按分离过程机制分 按流动相和固定相所处状态分 气相色谱（GC） 气液色谱 气固色谱 液相色谱（LC） 液液色谱 液固色谱 按固定相的固定方式分 柱色谱 纸色谱 薄层色谱 按固定相的固定方式分 柱色谱 纸色谱 薄层色谱 按分离过程机制分 吸附色谱 分配色谱 离子交换色谱 排阻色谱 按分离过程机制分 吸附色谱－利用吸附剂表面对不同组分吸附能力的 差异进行分离 分配色谱－利用不同组分在两相中分配系数差异进行分离 离子交换色谱－利用离子交换原理 排阻色谱－利用多孔性物质对不同大小分子排阻的差异，进行分离 色谱法的特点 分离效能高 可以分离100多个组分 灵敏度高 检测10-11~10-13g痕量物质 分析速度快 几分钟～十几分钟一个周期 应用范围广 气、液、固体，几乎所有物质 缺点：未知物的定性比较困难 色谱法的实质是组分的分离。 二、色谱法的分离原理 样品在固定相与流动相之间进行分配，很快达到分配平衡。 当流动相流过时，样品将在流动相和新的固定相中又达到分配平衡 同时原来仍在固定相中的样品与新的流动相之间也会形成新的分配平衡。 随着流动相的不断流过，它们携带分配平衡后的样品，沿着柱子向前流动。 在流动相中分配多的A组分在前，在固定相中分配多的B组分在后。从而分离。 分离的组分在柱中是一个组分段，所以出一个峰。 三、色谱图及常用术语 色谱图：试样各组分经色谱分离后，从柱后流出进入检测器，检测器将各组分浓度（或质量）的变化转换为电信号（电压或电流），再由记录仪记录下来，所得的电信号强度随时间变化的曲线，即为流出曲线，也称为色谱图，或者叫作色谱峰。 常用术语 基线：柱中只有流动相流过时，检测器的响应信号记录值 峰高h：色谱峰顶点与基线的垂直距离 区域宽度 峰底宽：Wb 半峰宽：1/2h处的峰宽，W1/2 标准偏差：0.607h处的峰宽为2? 峰面积：对称峰 A=1.065hW1/2 常用术语 保留值：表示试样中各组分在色谱柱内停留状况的一个指标，反映了组分分子与固定相分子间作用力的大小，通常用时间或载气体积来表示 用时间表示的保留值 用体积表示的保留值 用时间表示的保留值(单位：min，s等） 死时间（tM） 不被固定相保留的组分，从进样到出现最大峰所需的时间，也即流动相流经色谱柱所需的时间 保留时间（tR） 试样从进样到出现最大峰所需的时间 调整保留时间（tR’） tR’=tR-tM 用体积表示的保留值(单位：mL） 死体积（vM） 不被固定相保留的组分，通过色谱柱所消耗的流动相体积，可由死时间确定 保留体积（vR） 试样从进样到出现最大峰所通过的流动相体积 调整保留体积（vR’） vR’=vR-vM 由色谱图得出的结论 色谱峰的个数——判断组分的个数 色谱峰的保留值——定性分析 色谱峰的面积或峰高——定量分析 相对保留值?——固定相与流动相的选择是否合适 保留值、区域宽度——评价色谱柱分离效能的好坏 四、色谱法基本理论 两组分的分配系数有差异 区域扩散速率小于区域分离速率 塔板理论 塔板理论的结论： 理论塔板数n大于50，可得到峰形基本对称的曲线 只要被分离组分分配系数K有差异，只要n足够大，均可进行分离 n与半峰宽及峰底宽的关系 塔板理论的优点及局限性： 优点：提出了计算和评价柱效能高低的因素，而且很直观 缺点：1、纵向扩散不能忽略 2、分配系数与浓度无关只能在有限 的浓度范围内成立 3、色谱柱中没有真正的平衡体系 塔板理论解决的问题： 解释流出曲线的形状（正态分布）、浓度极大位置、评价柱效的公式。 不能解释： 影响塔板高度的因素、不同流速下塔板高度为何不同。 n越大，H越小，柱效越高。 但是n越大只是说明在色谱柱中组分分配次数更多，但是不能确定能否组分是否能分开。 决定组分分开的因素是组分的分配系数差别。 柱效只是说明柱分离效能发挥的程度。 为了弥补以上理论不足，发展了速率理论。 速率理论 1956年 荷兰 范弟姆特