功能学科基础实验操作.docVIP

基础实验 实验一、神经干复合动作电位的引导、传导速度的测定、不应期的测定 【实验目的】 利用蟾蜍的坐骨神经干标本，采用powerLab系统，通过生物电放大器引导并记录神经干复合动作电位。 分析复合动作电位的幅值与刺激强度的关系，以及测量复合动作电位的潜伏期、时程和幅值。测量复合动作电位的传导速度。验证和测量动作电位的不应期。 【实验原理】 可兴奋的组织受到适宜刺激后，在细胞膜表面产生生物电活动 动作电位。对单一的神经纤维而言，其动作电位呈“全或无”现象。在神经干中，由于不同的纤维其兴奋性有差异，随着刺激强度的增大，兴奋的纤维数目逐渐增多，神经干复合动作电位幅值也逐渐增强，直至最大。因此神经干复合动作电位的幅值与刺激条件有关。在实验中，两记录电极放置在神经干表面，记录已兴奋区域与未兴奋区域间的电位差。由于动作电位传导到神经干两记录电极放置点的时间有先后差异，将在两记录电极间引导出电位波动，出现类似于正弦波的电位变化，这就是神经干复合动作电位。 神经纤维受到适宜刺激后，产生动作电位。动作电位沿着细胞膜表面向四周传导。传导速度受到组织的兴奋性、传导性和组织结构等诸多因素影响。 神经纤维产生兴奋后，必须经绝对不应期、相对不应期、超常期等变化后，兴奋性才能恢复。 【实验动物】 蟾蜍。 【药品与器材】 蛙手术器械， PowerLab 8S主机，生物电放大器，铁架台，标本盒，任氏液。 【实验步骤】 1．标本制备 蟾蜍坐骨神经标本制备方法参见P19的蟾蜍神经肌肉标本的制备 。将标本浸在任氏液中约5min，待其兴奋性稳定后实验。 器装置及程序设置 （1）连接仪器（图5-1） 其中，S1 和S2为刺激电极，与PowerLab的output 1相连，R1和R 2为记录电极，与生物电放大器相连，R 3为接地电极。 （2）参数设置：启动计算机，打开PowerLab主机电源，在桌面上单击Chart5图标，进入Chart应用程序窗口。 1）选择采样速度为40K/s，显示比例为500:1。 2）在Channel 1显示神经干复合动作电位。放大器参数设置参见P35的放大器参数设置。Range为5～10mV，High Pass 为0.3～10Hz，Low Pass为1KHz。选50Hz Notch来抑制交流干扰。 3）在Channel 2显示刺激方波。在刺激参数设置对话框下方的Stimulator Marker框中选取Channel 2。刺激设置方法参见P39的刺激输出的设置。在Mode中选取Pulse（方波），单击Hz选项，Frequency（刺激频率）取1Hz，Pulse Duration（刺激波宽）选0.1ms。选中Set number of pulse选项，在Number中键入1，表示一次刺激输出1个刺激方波。Output Rang（刺激强度范围）为10V，Amplitude（刺激强度）取0，然后可在实验中逐渐增大。设置完毕后，单击菜单栏的setup，选取stimulator panel，弹出Stimulator Panel（刺激面板），在实验中可方便地由刺激面板来设置刺激频率、幅度和波宽等参数。实验中如要对标本进行刺激，应先用鼠标左键单击开始/停止切换按钮，程序开始采样记录，然后单击刺激面板的On按钮，即可产生刺激输出，同时Channel 2（2通道）显示刺激方波。 ①单次刺激：设置Mode为Pulse，单击Hz选项，Frequency 取1Hz，Pulse Duration选0.1ms。选中Set number of pulse选项，在Number中键入1，表示一次刺激输出1个刺激方波。Output Range为10V ，Amplitude为0，然后可在实验中逐渐增大刺激强度。 ②双次刺激：设置Mode为Pulse，单击Hz选项，Frequency 取1Hz，Pulse Duration选0.1ms。选中Set number of pulse选项，在Number中键入2（双刺激）。Output Range为10V，Amplitude选择最大刺激强度。在实验中通过Stimulator Panel(刺激面板）逐渐增大Frequency（刺激频率）。 实验中如要对标本进行刺激，应先用鼠标左键单击开始/停止切换按钮，程序开始采样记录，然后单击刺激面板的On按钮即可产生刺激输出，同时Channel 2（2通道）显示刺激方波。 4）连接装置：把坐骨神经干标本放入标本盒中，标本盒中每根金属丝与盒外的接线端口一一对应。神经干的中枢端放在刺激电极处，而外周端放在记录电极上。 观察项目（1）记录神经干复合动作电位。刺激标本，记录复合动作电位，分辨刺激伪迹和动作电位。逐渐增大刺激强度，记录动作电位随刺激强度而变化。并记下波宽0.1ms时的阈刺激（刚产生复合动作电位的