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2012-7-15 承担单位：福建省农科院农业生物资源研究所 试验设计： 试验项目：超声时间对短短芽胞杆菌FJAT-0809-GLX胞内物质提取的影响及物质分析 试验人员：马桂美 试验负责：车建美、刘波 报告日期：2012-7-15 计数月份：2012年6月 研究资格系数 (0.5-1.0) 实验设计系数 （0.9-1.0） 报告得分 总分 实验设计 实验记载 实验分析 实验简报 实验文章 1-20% 21-40% 41-60% 61-80% 81-100% 1%-5% 设计，实施实验，记载，分析清晰，结论清晰文献完整，发表水平 福建省农业科学院农业生物资源研究所 农业微生物研究中心 电话: 0591 传真: 05911．试验目的试验方法2.1 材料 2.1.1 试验材料 短短芽孢杆菌FJAT-0809-GLX为本实验室自己保存 2.1.2 试剂与仪器 （1）试剂： LB液体培养基：胰蛋白胨，1%，牛肉浸膏，0.5%，NaCl，0.5%，pH7.0-7.2，购自 乙酸乙酯。 （2）仪器：离心机、超声波细胞破碎仪、分光光度计、旋转蒸发仪、电子天平 2.2 试验方法（1）菌株活化，将短短芽孢杆菌FJAT-0809-GLX接种到20 mL液体培养基中，30 ℃ 170 rpm/min过夜培养。 （2）按1%接种量转接到发酵罐中，30 ℃，发酵48 h，再离心收集菌体。 （3）6000 rpm/min离心15 min，弃上清，收集菌体。 （4）用蒸馏水洗涤菌体4次。 （5）2.2.2 短短芽胞杆菌细胞破碎情况测定 （1）吸光值测定[1] 将待测处理菌液稀释100倍，用紫外分光光度计测定其A260、A280、A600值，每个处理做3个重复，取平均值；同时，用没有经过超声波裂解的短短芽胞杆菌培养物作对照。 （2）胞内物质有机溶剂萃取，旋转蒸发，计算所得物质的量。采用DPS软件对已得到的物质进行方差分析。试验结果由图1、2可知，超声时间对细胞破碎有影响，超声时间大于10min时，A260的值随着超声时间的增加而减少，超声时间过长，暴露在细胞外的核酸因受超声波的影响而裂解或断裂；超声时间大于10min时，A280的值随着超声时间的增加而减少，超声波致使细胞破碎，释放大量的菌体蛋白，超声时间过长，菌体蛋白受到破坏。A600的值随着超声时间的增加而减少，超声时间越长，细胞破碎程度越高，A600的值就越低。 图1 超声处理时间与吸光值的关系（260nm、280nm） 图2 超声处理时间与吸光值的关系（600nm） 表 超声波不同所得的物质质量超声条件：超声总时间不同，超声功率：500w，料液比：1：15，超声时间0.5s，间歇时间1.5s 超声时间（min） 试管质量（g） 溶液质量（g） 总质量（g） 所得物质的质量（g） 空白 11.03 3.6606 10min-1 10.8304 3.6606 14.7543 0.2633 10min-2 10.597 3.6606 14.5289 0.2713 10min-3 9.3611 3.6606 13.2068 0.2463 20min-1 9.0901 3.6606 12.9713 0.2206 20min-2 8.9442 3.6606 12.8661 0.2613 20min-3 10.6446 3.6606 14.621 0.3158 30min-1 9.2393 3.6606 13.2009 0.301 30min-2 9.0531 3.6606 12.6206 30min-3 9.4956 3.6606 13.5099 0.3537 40min-1 9.3058 3.6606 13.3153 0.3489 40min-2 9.5538 3.6606 13.4805 0.2661 40min-3 10.6757 3.6606 14.5627 0.2264 50min-1 8.7662 3.6606 12.6752 0.2484 50min-2 10.507 3.6606 14.4359 0.2683 50min-3 11.1574 3.6606 15.1311 0.3131 表 超声时间和所得物质质量差异分析 处理 均值 5%显著水平 1%极显著水平 30min 0.3773 　a 　A 40min 0.2921 　 b 　A 50min 0.2907 　 b 　A 10min 0.2756 　 b 　A 20min 0.2805 　 b 　A 胞内物质的GC-MS分析表3 超声10 min所得物质 物质编号 出峰时间 峰面积 登录号 物质名称 Qual值 1 19.121 1.85 000