重组肝素酶i 在大肠杆菌中的表达及纯化.pdf

药 物 生 物 技 术 Pharmaceutical Biotechnology 20 12 ，19 (5):377 ～ 380 377 · · 研究论文 I 重组肝素酶 在大肠杆菌中的表达及纯化 * ， ， ， 任永海 李晓燕 黄 磊 徐志南 ( ， 310027) 浙江大学化学工程与生物工程学系 浙江杭州 I E. coli BL2 1 (DE3)/ pOFX-T7 -SL1 ， 摘 要 优化肝素裂解酶 在大肠杆菌 中的重组表达条件 结果显示接 6 h (OD 2. 5) 0. 25 mmol / L IPTG ， 25 ℃ 8 h 1. 49 × 105 IU / L 。 种 600 ≈ 后加入 在 下表达 目标蛋白酶活达到最高值 进 5 L ，20 h 5. 55 × 105 IU / L 。 ， I 一步于 发酵罐中扩大培养 后最高酶活达到 利用亲和层析分离目标蛋白 肝素裂解酶 96% ， 37. 58% ， 1. 12 × 103 IU / mg 。 I 的纯度可达到 回收率为 比酶活达到 肝素裂解酶 的高效表达为大规模利用酶 法制备低分子肝素打下了坚实的基础。 ; ; ; ; ; 关键词 肝素酶Ⅰ 大肠杆菌 重组表达 分离纯化 分子伴侣 优化 中图分类号 Q55 文献标志码 A 文章编号 1005-8915 (2012)05-0377-04 L- D- pET15b pET28a ， pET15b- Hep I ， 肝素是由 艾杜糖醛酸和 葡萄糖醛酸组成的硫酸 和 中 只有 具有可溶表达 ［6］ ［7］ ， ， (97. 8 IU / L ) 。 Chen 氨基葡聚糖 属于粘多糖类 具有抗凝血等重要的生物学功 但是表达量极低 发酵液 而 等 将 能， 。 Hep I MBP ， 90% 是我国目