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茶树咖啡碱合酶cdna 在大肠杆菌中的表达 - 南京农业大学学报
南京农业大学学报 2004 , 27 (4) : 105～109
Journal of Nanjing Agricultural University
茶树咖啡碱合酶 cDNA 在大肠杆菌中的表达
1 1 2 1 1
余有本 , 江昌俊 , 王朝霞 , 李叶云 , 宛晓春
( 1 安徽农业大学农业部茶叶生物化学和生物技术重点开放实验室 , 安徽 合肥 230036 ;
2 安徽省教育学院 , 安徽 合肥 230061)
摘要 : 通过 RTPCR 法扩增出茶树咖啡碱合酶 ( TCS) cDNA 编码区全序列 , 并将其克隆到表达载体 pET 32a ( + ) 中 , 得
到重组质粒pETTCS , 在表达宿主菌 BL21trxB (DE3) 中高效表达 , 产生相对分子质量约为 62 000 的融合蛋白。该融合蛋
白包括112 个氨基酸残基的硫氧还原蛋白及 370 个氨基酸残基的茶树 TCS 蛋白。实验结果表明 , 随着诱导时间的延长 ,
表达的融合蛋白产量逐渐增加 , 表达蛋白总量最高可达到菌体总蛋白的 3914 % ; 在 15 、25 和 37 ℃3 个不同的诱导温度
下 , 均能诱导产生融合蛋白 , 而且产生的总量及其可溶性部分所占比例均随诱导温度升高而增加 ; 在菌体的各个部位
中 , 融合蛋白主要在细胞质中以可溶的形式进行表达 , 有少量在外周质中表达或以包涵体形式在细胞质中表达。另外 ,
体外酶促反应表明 , 表达的融合蛋白能催化可可碱甲基化生成咖啡碱 , 具有正常的生物学活性。
关键词 : 茶树 ; 咖啡碱合酶 cDNA ; 大肠杆菌 ; 表达
中图分类号: S571101 文献标识码 : A 文章编号 : 1000 2030 (2004) 04 0105 05
Expression of tea caffeine synthase cDNA in Escherichia coli
1 1 2 1 1
YU Youben , J IANG Changjun , WANG Zhaoxia , LI Yeyun , WAN Xiaochun
( 1Key Laboratory of Tea Chemistry and Biotechnology , Ministry of Agriculture , Anhui Agricultural
University , Hefei 230036 , China ; 2Anhui Institute of Education , Hefei 230061 , China)
Abstract : Tea caffeine synthase ( TCS) gene cDNA code region was amplified by RTPCR. The DNA fragment was cloned into expression
vector pET 32a ( + ) , forming recombinant pETTCS. Expression of the plasmid
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