RNA转录合成.ppt

第8章 RNA的转录合成 Section 8 RNA Transcription;原核生物RNA的转录 RNA Transcription in Prokaryotes;转录:以DNA为模板,在依赖于DNA的RNA聚合酶催化之下的一系列RNA酶促合成过程叫做转录,包括RNA链的起始、延伸、终止等步骤。 ;;大肠杆菌RNA聚合酶 E.coli RNA Polymerase;1 α亚基: 核心RNA聚合酶有2个α亚基,由rpoA基因编码. 功能： 1）参与RNA核心酶的组装,尚未发现有明确的转录功能。 2）参与全酶和启动子的牢固结合。 3）当RNA聚合酶核心酶沿着模板移动进行RNA链的延伸时,保证DNA双螺旋的不断地在前面解开,在后面恢复双螺旋。;2 β亚基: 是RNA聚合酶的催化中心, 由rpoB 基因编码.可能含有两个结构域, 分别负责转录的起始和延伸.具体是 ：结合核苷酸 底物并催化磷酸二酯键形成 证据:(1)抗生素利福平:与β亚基结合,阻止RNA聚合酶 转录的开始; (2)利迪链菌素也与β亚基结合,抑制转录延伸. ;3 β’亚基:是RNA聚合酶的催化中心，由rpoC 基因编码, 负责核心酶与模板DNA的结合。 ;4 σ因子: 大肠杆菌中最常见的σ因子是σ70. 特性: （1）与核心酶结合形成了全酶,在启动子识别中 起关键性的作用； （2）原核生物含有多种σ因子，以能识别各种类型的启动子； （3）RNA链延伸至8-9nt时， σ因子就离开核心酶； （4） σ因子数量只有核心酶的30%，因此在任何时刻只有1/3的聚 合酶是全酶。;5 ω亚基： ω亚基的功能尚不清楚,也有人认为ω亚基对于RNA聚合酶的结构和功能没有太大的影响。; 大肠杆菌σ70 启动子 The E.coli σ70 promoter;2. σ70的特征 大小40-60bp; -10序列, 也叫pribnow框,含有保守序列 TATAAT, 其中带底线的称为保守T,它存在于目前已知的几乎所有启动子中,一般位于－6(5)到－9(8).该序列是聚合酶启动DNA解旋的序列.;2. σ70的特征(续上) -35序列, 也叫Sextama框,也是RNA聚合酶覆盖的部分。 RNA聚合酶依靠其σ亚基识别该位点,因此又称为RNA聚合酶识别位点。其保守序列为TTGACA。;;启动子效率 -10序列和-35序列之间距离的改变影响启动子的活性。间隔17bp活性最强（16-18，15-20bp） 弱启动子没有-35序列。如：lac启动子，lac基因的表达需要一个辅助激活因子受体蛋白CAP(cyclic AMP receptor proteizod) 与靠近启动子上的CRP位点结合，以增强启动子与RNA聚合酶的结合从而进行转录起始。; 转录的起始、延伸与终止 Transcription, Initiation , Elongation and Termination;1.Promoter binding;12bp;Termination (1)不依赖ρ因子的转录终止(Rho-indepent termination) ;则爹宁焉巷伸蓖酿泞袒耪凿厂滨久擦憨笋众边赠惕匠翼梯庞厩闪智阉争成RNA转录合成RNA转录合成;(2) 依赖ρ因子的转录终止 (Rho-depent termination);ρ因子是RNA聚合酶的一种重要的蛋白质辅助因子。催化解开DNA-DNA和RNA-DNA双螺旋结构。;真核生物RNA的转录 Transcription in Eukaryotes;真核生物RNA聚合酶 Eukaryotic RNA Polymerases ;3种RNA聚合酶的性质和功能;RNA聚合酶亚基 RNA polymerase subunits; 真核生物RNA聚合酶的活性 Eukaryotic RNA polymerase activity ;;真核生物的转录因子;真核生物的启动子 Eukaryotic Promoter;rRNA 基因(rDNA) 人类rDNA编码产生一个45S的rRNA转录物 (13000nt)，这一转录物随后被切成18S (2000nt), 5.8S (160nt) 和 28S (5000 nt)各1个的 rRNA. 人类细胞在不同的染色体上分布有5簇rDNA重复基因（串联基因簇），每簇有40个拷贝，拷贝之间被非转录的间隔序列分开（图） 这种RNA多基因拷贝的连续转录是产生足够且加工的rRNA。rRNA和蛋白质结合形成了核糖体;45S rRNA;每一个rRNA簇被称为一个核组织区域（nucleolar or