重组人psoriasin蛋白的制备与鉴定.pdfVIP

山东医药2008年第48卷第4 重组人 psoriasin蛋 白的制备与鉴定 陈章权。梁晓东。陆田田，黄 震 (广东医学院临床免疫学教研室，广东湛江524023) [摘要】 目的 制备鉴定人psoriasin重组蛋白，为其作用机制的深入研究奠定基础。方法 PCR法扩增人 psoriasin基因，克隆至 pE128原核表达载体，转化大肠杆菌BL21(DE3)。用异丙基-B-D一硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导 重组蛋白表达，用 Ni“．NTA凝胶亲和层析纯化 目的蛋白，用十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶 电泳 (SDS—PAGE)和 Westernblot法对重组蛋白的相对分子质量、纯度和免疫原性进行分析。结果 psoriasin编码区基因扩增得到一 306bp特异条带，BLAST分析显示碱基无突变，阅读框架正确；SDS—PAGE显示纯化出相对分子质量为 14kD的重 组psoriasin，纯度 >95％；Westernblot显示该重组蛋白能与抗人psoriasin单克隆抗体发生特异性反应。结论 psor- iasin重组蛋白成功制备，该蛋白具有较好的免疫活性，可用于进一步的研究。 [关键词] psoriasin；表达；纯化；鉴定 [中图分类号】 Q786 [文献标识码] A [文章编号] 1002-266X(2008)48-0021-03 Preparationand lndentificationoftherecombinanthumanpsoriasinprotein CHEN Zhang—quan，LlANGXiao—d0， ，LU Tian—tian，HUANG Zhen (DepartmentofClinicalImmuno~gy，GuangdongMedicalCollege，Zhanjiang524023，P．R．China) Abstract：0bjective Toprepareandidentifythehumna recombinantpsoriasinprotein，SOastoinvestigateitsmeeb- anism．M ethods Thehumna psoriasingenewasamplifiedbyPCR nadclonde intoprokaryoficexpressionvectorpET28． TherecombinantplasmidpET28／psoriasinwastransformedintoE．coliBL21(DE3)andexpressde withIPTG induction． TherecombinantpsoriasinWas purifiedthroughNi ·NTA agarosecolumnandidentifiedbySDSandWestern blot． Results Th erecombinanthumanpsoriasinWas expressedinDE3and purifiedsuccessfully．Western blotshowde there— combinantproteincouldbindtheanti—hmu na psoriasinmon~lonM antibodyspecifically．Conclusion Th erecombinanthu- manpsoriasincanbepreparedsuccessfully，whichhavefineimmunity． Keywords：psoriasin；expression；purification；identification psoriasin是S100家族成员之一，在表皮过度增 1．2 方法 生性疾病中呈高水平表达…，但其在疾病进程中的 1．2．1 psoriasin基因的克隆 取手术切除的新鲜 作用及其作用机制 尚不清楚。为对此进行深入研 乳腺癌组织，抽提 RNA。经 电泳证实 RNA无降解 究，2007年 12月 ～2008年6月，我们进行了psoria。 后进行反转录，按试剂盒说明操作。根据人 psoria。 sin重组蛋白的制备与鉴定。现报告如下。 sin基因序列(GenBank登录号为BC034687)，设计 1 材料与方法