米曲霉中性蛋白酶高产菌株的复合诱变选育论文.pdfVIP

科技信息 O科教前沿0 SCIENCETECHNOLOGYINFORMATION 2013年 第 1期 米曲霉中性蛋白酶高产菌株的复合诱变选育 袁艳玲 杨生玉 钱 深 施亚磊 (河南大学 生命科学学院，河南 开封 475004) 【摘 要】利用紫外线和化学诱变剂硫酸二乙酯对米曲霉H10进行复合诱变，选育出产中性蛋白酶高产菌株H12—5。该菌株比对照茵株中 性蛋白酶活力提高 108．5％ 【关键词】复合诱变；米曲霉；中性蛋白酶 A【bstract]AmutantstrainH12-5withhighyieldofneutralproteasewasproducedbyUVandDESmutationusingAsperfgillusoryzaeHIOas controlstrain．Theneutralproteaseofthestrainwas108．5％ higerthanthatof controlstrain．Theneutralproteaseactivityof themutantstrainwas stableafterfivegeneration． K【eywords]Compoundmutation；Aspergillusoryzea；Neutralprotease 目前，酱及酱油的工业化生产中普遍使用米曲霉作为发酵菌株． 变剂浓度。将紫外诱变选育出的菌株制成孢子菌悬液．取5mL孢子洗 发酵菌种的特性决定了生产工艺的优劣，同时对产品的风味、质地和 脱液与诱变剂混匀．反应后加入 lmL2％的硫代硫酸钠作为解毒剂． 质量起着决定性作用。工业微生物菌种选育的目的旨在能够提供一株 然后进行梯度稀释，涂布．培养于筛选培养基中3d—4d．挑选出HE值 质量优异的菌株，该菌株应具备性状优 良且遗传性能稳定的特点，因 大且生长较快的菌株．接人察氏培养基斜面保存备用 将诱变后的菌 此有必要不断发掘新菌种或改 良现有菌种以满足工业生产的要求 在 株接入土豆培养基中200rpm培养2d．然后以10％的接种量接人发酵 制酱过程中采用不同的米曲霉菌种制曲将会产生不同的风味和营养． 培养基中，30E，恒温培养3d，检测中性蛋白酶酶活力。 这是因为酱发酵是它所分泌的多种酶综合作用的结果 其中最重要的 1．3．5 遗传稳定性测定 是蛋白酶和淀粉酶。本研究通过复合诱变筛选出中性蛋白酶活力高、 将硫酸二乙酯诱变筛选得到的菌株进行传代培养5代．检测稳定 综合性状优 良且适合工业化生产的菌株．为制酱过程进一步理论研 性。 究及应用提供了良好的菌种资源 2 结果与分析 1 材料与方法 2．1 紫外诱变结果 1．1 供试菌株 2．1．1 紫外诱变时间选择 米曲霉H10(由河南大学生物工程实验室提供) 由经验得知诱变致死率在70％左右效果最好．本实验在诱变时间 1．2 培养基 120s时．致死率在71．3％．故本实验选择最佳诱变时间为 120s．距离 米曲霉活化培养基：察氏培养基 25cm。 中性蛋白酶活力筛选培养基： 2．1．2 紫外诱变对中性蛋白酶活力的影响．见图 1： K2HP04O．36gMgSO4·7H2O 0．5g ZnC120．014g Na2HPOa·7H20 1．07g NaC10．16g FeSO 0．O02g CaC10．002g 干酪素 4g 胰蛋白胨 0．05g 琼脂20g 蒸馏水 1000mL PH7．0121℃20min 土豆培养基 ：马铃薯 20g 蔗糖 2g 自来水 100mL 马铃薯去 皮 ．切成块加水，煮沸 30min(注意火力的控制 ，可适当补水)，用纱布 过滤．滤液加糖．补足水至 100mL