中性粒细胞碱性磷酸酶在血液病诊断中的应用.doc

中性粒细胞碱性磷酸酶在血液病诊断中的应用 摘　要:目的　探讨中性粒细胞碱性磷酸酶(NAP) 染色在血液系统疾病患者诊断与鉴别诊断中的应用意义。方法　抽取198 例临床确诊的血液病患者和60 名正常健康人(男38例,女22例) 静脉血,制备血涂片。所有血涂片依改良Gomori 氏法进行ALP 细胞免疫组织化学染色,显微镜油镜观察100个中性粒细胞,以阳性率和积分记录结果。结果　急性淋巴细胞白血病(ALL) 、再生障碍性贫血(AA) 、多发性骨髓瘤(MM) 、骨髓增殖性疾病MPD患者的NAP 阳性率和积分则明显高于正常对照组(P 0.05) ,急性髓细胞白血病(AML) 、慢性粒细胞白血病(CML)患者的NAP 阳性率和积分均明显低于正常对照组(P 0.05)；骨髓增生异常综合症(MDS) 者与正常对照组比较则差异无统计学意义(P 0.05)。结论　根据NAP 活性的特性在很多血液疾病中都可以把其作为诊断及鉴别诊断的判断指标。 关键词:碱性磷酸酶;中性粒细胞碱性磷酸酶染色;血液病;诊断 中性粒细胞碱性磷酸酶( neutrophilic alkalinephosphatase,N A P) 是中性粒细胞的标志酶, 因检测方法简便、快速, 在血液系统疾病诊断尤其在类白血病反应与恶性血液病鉴别中有重要的临床应用价值。为研究N A P 活性对各血液病的诊断、鉴别诊断及疗效观察中的价值, 我们总结了366 例血液系统疾病患者NAP 活性观察,进行对比分析,以探讨其在血液系统疾病诊断和鉴别诊断中的应用意义。 1 　对象和方法 1.1临床资料 本组198 例血液病均来源于我院血液科2002～2008年经骨髓涂片细胞学分析、病理检查及有关实验室检查并结合临床参照文献[1]确诊病例, 其中男104 例,女94例。病种: 急性髓细胞白血病(AML) 61 例,急性淋巴细胞白血病(ALL)37 例, 再生障碍性贫血(AA) 32 例, 多发性骨髓瘤(MM) 32 例。慢性粒细胞白血病(CML) 23 例,骨髓增殖性疾病(MPD) 19 例, 骨髓增生异常综合症(MDS) 15 例,健康人群60例为对照组,其中男38 例,女22 例。患者和健康人群均采集静脉血制备血涂片2 张。 1.2 　试剂及仪器 1.2.1 试剂 NAP 阳性率及积分采用Kaplow 偶氮耦联法检测。Kaplow 偶氮偶联法: ①固定液: 25 %甲醛乙醇溶液; ②丙二醇缓冲液:0. 05 mmol/ L 2 - 氨基- 2 - 甲基- 1 ,3 -丙二醇溶液(pH9. 75)③基质孵育液(pH9. 4 - 9. 6 新鲜配制) :α- 磷酸萘酚钠20mg 溶于缓冲液20ml , 再加入坚牢蓝RR20mg④苏木素复染液。细胞染色方法:新鲜血片用固定液冷固定(4～10 ℃) 30s ,水洗、晾干后放入基质孵育液(按上述方法新鲜配制) 中,37 ℃温浴30min ,流水冲洗,晾干后苏木素复染液复染5min ,水洗、晾干。 1.2.2 实验方法及结果判断 抽取患者及健康体检者静脉抗凝血2 m l, 制成血片。将新鲜血片固定5 s, 水冲待干后, 用底物液37 ℃下作用15 m in, 水冲待干后用苏木精复染及0.5 % 氨水返蓝后即可。N A P 阳性颗粒为红色。用油镜观察100 个中性粒细胞, 根据其胞质内N A P 颗粒的多少从(-) ,(+) ,(++) ,(+++) ,(++++) 进行分类计数,并记录阳性率及积分。 1.3 　细胞染色 采用改良Gomori氏法: 将血涂片用新鲜配制的95 %乙醇固定10min ,蒸馏水轻洗,待干;基质液按上述方法配好后(以精密PH 试纸测pH 9. 4～9. 6) 放37 ℃恒温水浴箱30min ,再将固定好的血片置基质中温浴5h 以上;取出后在蒸馏水中轻洗,自然干燥后放入20g/ L 硝酸钴中5min ;蒸馏水轻洗,自然干燥后放入20g/ L 硫化铵5min ;流水冲洗,干燥后置5g/ L 伊红复染5min ,自来水冲洗,待干燥后镜检。 1.5 　统计学处理 采用EpiData3.0软件建立数据库，并运用SPSS10.0 统计软件数据分析。 计量资料以x ±s 表示,组间的两两比较采用Wilcoxon秩和检验分析。 2 　结果 2.1 　正常健康人群NAP 阳性率和积分的测定 本组正常健康人群中男性NAP 阳性率为28.6% ,积分为39.5 ;女性NAP 阳性率为28.0 % ,积分为38.9。经统计分析正常健康人群中中性粒细胞碱性磷酸酶染色阳性率和积分的值呈偏态分布,对正常健康人群中男性和女性NAP 阳性率和积分结果进行比较,经Wilcoxon秩和检验发现，两组阳性率(P 0.05) 和积分差异均无统计学意义(P0.05) 。 各型血液系统