唾液酸酶说明书 - 正邦典生物工程有限公司_石家庄正邦典科技有限 .doc

唾液酸酶 （EC 8) （来源于基因工程菌） ：RECOMBINANT NanH Sialyllactose + H2O N-Acetylneuraminate + Lactose 一、产品介绍 外 观： 白色无定形粉末 比 活 性： ≥U/mg 稳 定 性： -20℃至少稳定 分 子 量： KD 等 电 点： 米氏常数： 抑 制 剂： 不受叠氮钠的抑制 pH稳定性： .5～10℃ 16hr） （Fig. 1） 最 适 pH： ～ （Fig. 2） 最适温度： 0℃ （Fig. 3） 热稳定性： ℃以下30min （Fig. 4） 二、酶活测定方法 检测原理 酶活定义 1唾液酸酶等于在下述反应条件中每分钟水解1mol 唾液乳糖（或氧化1mol NADH）所需要的酶量。 检测方法 酶活检测试剂配制方法A. 50mM PbS-K, pH 7.5，4℃保存。 B. 8.0mM 唾液乳糖 (N-Acetylneuraminosyl-D-lactose) 52.5mg 3-Sialyllactose (sodium salt，MW= 655.53，Carbosynth)溶于10ml 预冷的Buffer A。冰浴备用，或分装后冻存于-20℃。 C. 100U/ml NAL 用预冷的Buffer A将唾液酸醛缩酶(N-acetylneuraminic acid aldolase，Toyobo NAL-301) 稀释至100U/ml，冰浴备用。 4℃保存。 D. 100U/ml LDH 用预冷的Buffer A将LDH(乳酸脱氢酶)稀释至100U/ml，冰浴备用。4℃保存。 E. 2.5mM NADH 17.8mg NADH (MW=709.4) 溶于10ml去离子水，分装后，-20℃保存；临用前解冻，冰浴备用。 F. 酶稀释液 125mg BSA溶于100ml Buffer A中，至终浓度为0.125%（W/V），冰浴备用。4℃保存。 待测样品的配制 检测前称量所需酶，酶称量时，应至少称量10毫克的酶，以保证称量的准确性。用溶解，定容到配制体积。 酶活检测步骤 Reagent Solution ul R1 A 2500 B 6000 E 1000 R2 C 1250 D 1250 3.3.2按“R1+R2=475ul+125ul”添加至“d=1.0cm，容积为800ul”的石英比色皿中37℃温浴2min；待测酶液充分混合均匀，37℃；记录内OD的变化，并计算每分钟吸光值变化（△As/min）重复以上步骤，用μl酶稀释液作为阴性对照。记录空白吸光值（△Ab/min）。活力计算：△A/min=△As/min-△Ab/min Vt 反应总体积() ε NADH在340nm处的吸光系数为6.22cm2/mol Vs 样品体积() d 光路长度(1cm) D 稀释倍数 200~500U/L 参考： NRH-301说明书 三、 附图 石家庄正邦典科技 有限公司 地址：石家庄市桥东区建设北大街2号燕华大厦24层网址：E-mail:zbdbio@ 电话：0311-8094063515081120557 反应混合物中各成分浓度 Pbs-K 46mM 3-Sialyllactose 3.84mM NAL 10U/ml LDH 10U/ml NADH 0.2mM pH 7.45