核酸血液筛查-上海浩源.pptVIP

核酸血液筛查相关技术 P* * dUTP-UNG优缺点 缺点 优点 Text Text 防止含dU产物的污染 不影响目的片段的扩增 作用条件简单，易实现。 只防自身产物的污染，不防天然产物的污染。 若混有核酸酶，会同时分解目的产物。 UNG致使CT值增加，易导致假阴性。 dUTP在对GC丰富的模板时作用不大。 灭活不够完全。 相对用dTTP，成本高。 核酸血液筛查相关技术 P* * 内对照分子 Text Text 内参照的概念 人工合成的小片段DNA，放在反应液中和待测目的基因一起扩增。 内对照是PCR方法检测疾病基因的必需成分，是防止假阴性、提高检测结果可靠性的重要标示。 内对照对整个实验流程，包括样品提取、分装、PCR热循环仪孔间差、PCR抑制元素等等可能的影响因素进行监控，防止假阴性，提高安全性 核酸血液筛查相关技术 P* * 竞争性内对照分子 3’ 5’ 5’ 3’ 3’ 5’ 1 20 291 310 (BP) 两端为特异性引物 目的基因片段 内对照顺序 竞争性内对照的概念 与目的基因使用相同的引物。 扩增产物序列与目的基因不同，可用不同的探针检测。 核酸血液筛查相关技术 P* * 竞争性内对照分子 3’ 5’ 5’ 3’ 3’ 5’ 1 20 291 310 (BP) 内对照特异性引物 目的基因片段 内对照顺序 非竞争性内对照的概念 与目的基因使用不同的引物。 扩增产物序列与目的基因不同，可用不同的探针检测。 目的基因特异性引物 核酸血液筛查相关技术 P* * 内对照分子 内对照的作用 真实反应扩增效率 避免假阴性：假阴性是目前血液筛查中最重视的问题之一，内标全程进行质量监控质控 血筛核酸检测的内对照设计理念 中心理念：监测全程的实验过程包含病毒核酸提取、反转录、及扩增过程的效率。 内对照选用：最好能达到上述三个条件，且能顾及仿真病毒的安全性。 核酸血液筛查系统 P* * 核酸血液筛查系统 核酸检测样本汇集设备 自动化核酸提取设备 PCR扩增和扩增产物的检测设备 核酸血液筛查系统 P* * 核酸血液筛查系统 分析后 采集容器 采集方式 保存运输 不合格样本： 脂血、溶血、样本量不足 样本 分析中 分析前 检测结果 纯化试剂 准备 仪器 维护 自检 准备： 质控 样本 试剂 前处理 混样 信息录入 扩增检测 核酸纯化 检测系统 试剂` 设备 质控品 检测试剂的准备 核酸血液筛查系统 P* * 核酸检测样本汇集设备 加样器 HAMILTON 液体工作站 核酸血液筛查系统 P* * 自动化核酸提取设备 自动化核酸提取(EZbead system-32) 核酸血液筛查系统 P* * PCR扩增和扩增产物的检测设备 ABI7500实时荧光定量PCR仪 血站核酸检测样本的采集、运送和保存 P* * 血站核酸检测样本的采集、运送和保存 样本的采集 样本的运送 样本的接收与保存 血站核酸检测样本的采集、运送和保存 P* * 关注采集、保存、运输的细节 运输条件 离心 采血管 P* * 标本的采集-采血管 无菌真空采血管 一、血清管 普通血清管 带分离胶的血清管 二、抗凝管 EDTA 2K或3K抗凝管 EDTA 2K抗凝间分离胶（PPT) 枸橼酸钠抗凝管 血站核酸检测样本的采集、运送和保存 P* * 标本的采集-离心 离心条件 800-1600g 20min 离心分离的时间要求—HCV RNA 和HIV RNA 研究方式不同（样本、检测）结论差异大 离心时间 完成地点 血站核酸检测样本的采集、运送和保存 P* * 标本的运送 2-8°C稳定48hr 血站核酸检测样本的采集、运送和保存 P* * 标本的接收、保存 确认标本数量 运输状态 标本状态：溶血、脂血 保存： 用于检测的样本管：检测前保存 用于留样备查的样本：样本量 血站核酸检测样本的采集、运送和保存 P* * 检测前核对 状态 标识 接收时间 离心后至检测前2-8°C保存不超过48小时 血站核酸检测样本的采集、运送和保存