翘嘴鳜铜锌超氧化物歧化酶重组蛋白表达、纯化及特性分 析咨询.pdfVIP

淡水渔业,2017,47 (2): 11-17 2017年3月 Freshwater Fisheries　 　 　 　 　 　 Mar．2017 翘嘴鳜铜锌超氧化物歧化酶重组蛋白表达、 纯化及特性分析 1 2 1 1 1 1 1 1 肖　 俊 , 许亮清 , 胡向萍 , 程周玉 , 胡宝庆 , 简少卿 , 阳　 钢 , 文春根 (1． 南昌大学生命科学学院, 南昌, 330031;2． 南昌市科学院畜牧水产研究所, 南昌, 330038) 摘要: 超氧化物歧化酶(SOD)是清除生物体内超氧阴离子自由基的一种重要抗氧化酶。 本研究根据翘嘴鳜 (Sini- perca chuatsi) Cu/ Zn-SOD基因序列 (GenBank登录号:KJ558392．1) 设计表达引物, 扩增获得截去信号肽后的 一段460 bp 的序列, 序列经过鉴定后, 构建了重组表达质粒 pET -30a +ScCu/ Zn -SOD, 并将该质粒转入到 BL21(DE3) 中, 用IPTG诱导进行表达。 经过优化表达条件得到可溶的ScCu/ Zn -SOD重组蛋白(rScCu/ Zn - SOD), 纯化重组蛋白后测定rScCu/ Zn-SOD的浓度和酶活性。 结果发现在20 ℃和37 ℃条件下均能够诱导Sc- 2+ 2+ Cu/ Zn-SOD的表达。 37 ℃时重组蛋白主要以包涵体形式存在。 降低诱导温度和补充Cu / Zn 可提高rScCu/ Zn -SOD的表达量。 在20 ℃、 0．5 mmol/ LIPTG条件下, 添加0．5 mmol/ LCuSO 和0．1mmol/ LZnCl 于培养基中, 4 2 重组蛋白的表达量明显升高。 纯化后的重组蛋白浓度为0．14 mg/ mL, 酶活力为108．5 U/ mg。 rScCu/ Zn-SOD最 适温度为37 ℃, 最适pH为7．0, 可耐受5% 浓度的SDS蛋白质变性剂。 本结果可以为研究SOD蛋白特性和功 能提供基础资料。 关键词: 翘嘴鳜(Siniperca chuatsi); 铜锌超氧化物歧化酶; 原核表达; 蛋白特性 中图分类号: S917. 4　 　 　 　 　 文献标识码: A　 　 　 　 　 文章编号: 1000-6907-(2017)02-0011-07 Analysis and characterization on recombinant protein of Cu/ Zn superoxide dismutase from Siniperca chuatsi 1 2 1 1 _IAOJun ,_U Liang-qing ,HU _iang-ping ,CHENGZhou-yu , 1 1 1 1