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紫外本质发射光谱吸收光谱灵敏度10
一、紫外—可见光分光光度法 基本原理 概述:紫外-可见分光光度法是通过被测物质在紫外-可见光区的特定波长或一定波长范围内光的吸收度,对该物质进行定性和定量分析的方法。主要用于药品的鉴别、检查和含量测定。 范围: Beer-Lambort 定律 仪器分类 单光束紫外可见分光光度计 准双光束紫外可见分光光度计 双光束紫外可见分光光度计 双波长紫外可见分光光度计 主要应用 利用药物与杂质对光的选择性吸收性质的差异,若药物在杂质的最大吸收波长处没有吸收,则可在此波长处测样品溶液的吸收度,通过控制样品溶液吸收度来控制杂质的量。 例:地蒽酚中二羟基蒽醌的检查 二羟基蒽醌的三氯甲烷溶液 在432nm处有最大吸收,而 地蒽酚在该处几乎无吸收。 1.判别物质的异构体,如互变异构体,顺反异构体,开链和成环异构体,旋光异构体,空间异构体等。反式异构体空间位阻小,共轭程度较完全。最大吸收峰波长,最大摩尔吸收系数,大于顺式。 2.推测物质的共轭体系和部分骨架 一般需与色谱,红外,质谱,波谱等多种仪器联合作物质的结构分析。 紫外分光光度测定方法 普通测定分光光度法 1.单组分的测定 通常采用 A-C 标准曲线法定量测定。 2.多组分的同时测定 ⑴若各组分的吸收曲线互不重叠,则可在各自最大吸收波长处分别进行测定。这本质上与单组分测定没有区别。 ⑵若各组分的吸收曲线互有重叠,则可根据吸光度的加合性求解联立方程组得出各组分的含量。 Aλ1= εaλ1bca + εbλ1bcb Aλ2= εaλ2bca + εbλ2bcb 差示分光光度法 普通分光光度法一般只适于测定微量组分,当待测组分含量较高时,将产生较大的误差。需采用示差法。 即提高入射光强度,并采用浓度稍低于待测溶液浓度的标准溶液作参比溶液。 设:待测溶液浓度为cx,标准溶液浓度为cs(cs cx)。则: Ax= εb cx As = εb cs ΔA=Ax -As =εb(cx - cs )=εbΔc 测得的吸光度相当于普通法中待测溶液与标准溶液的吸光度之差ΔA。示差法测得的吸光度与Δc呈直线关系。由标准曲线上查得相应的Δc值,则待测溶液浓度cx : cx = cs + Δc 双波长分光光度法 不需空白溶液作参比;但需要两个单色器获得两束单色光(λ1和λ2);以参比波长λ1处的吸光度Aλ1作为参比,来消除干扰。在分析浑浊或背景吸收较大的复杂试样时显示出很大的优越性。灵敏度、选择性、测量精密度等方面都比单波长法有所提高。 ΔA=A λ2 -A λ1 =(ελ2 -ελ1 ) b c 两波长处测得的吸光度差值ΔA与待测组分浓度成正比 (例子:课本366页) 导数分光光度法 导数分光光度法在多组分同时测定、浑浊样品分析、消除背景干扰、加强光谱的精细结构以及复杂光谱的辨析等方面,显示了很大的优越性。 利用吸光度(或透光度)对波长的导数曲线来进行分析: I=I0 e-εbc 假定入射光强度I0 在整个波长范围内保持恒定: dI 0 /dλ=0 则:dI/dλ=-I0 bc e -εbc dε/dλ =-I0 bc dε/dλ (例子:课本233页) 其他 卡尔曼滤波法 偏最小二乘法 小波变换 三波长分光光度法 系数倍率法 …… 原理 荧光—分子吸收电磁波后,从其最低激发态重新发射紫外线或可见光的现象 利用某些物质被一定波长的光照射后所产生的,能够反映该物质特性的荧光来进行定性定量的分析方法——荧光分析法。 光照 分子基态 激发态 辐射跃迁 荧光 若光源是: 由荧光波长可确定物质分子 可见-紫外光源 分子荧光分析法 具有结构 由荧光强度可测物质的含量 原子特征光谱作光源 原子荧光分
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