凋亡肿瘤细胞负载的树突状细胞诱导细胞毒性T细胞抗肿瘤作用分析.pdfVIP

塑主壁塑塑堕墨墼竺塾窒鉴塑塑堡量塑坚童堡三塑些垫壁堕堡旦堡茎——————————————i!—墨 凋亡肿瘤细胞负载的树突状细胞诱导CTL 抗肿瘤作用研究 摘 要 树突状细胞(DC)是体内功能最强的专职抗原递呈细胞 (APC)，在机体免疫应答中起重要作用。几十年来，尤其是最近十 年分子生物学、细胞生物学和生物化学的研究不断地揭示了DC新的 生理功能，DC在肿瘤免疫、抗感染免疫、自身免疫病和移植免疫中 的作用日益受到重视。本实验对DC抗原负载后诱导抗原特异性细胞 毒性T细胞(CTL)的功能进行研究，在此基础上初步建立了体外扩 增CTL的优化方案。 一、 凋亡肿瘤细胞负载Dc的功能研究 DC在体内外都具有高效扩增T细胞的能力。未成熟的DC摄取 抗原的能力很强，但抗原递呈能力弱；成熟DC具有很强的抗原递呈 能力，几乎丧失抗原吞噬能力。未成熟DC可以诱导免疫耐受的产生， DC的这些生物学特性在介导机体正常的免疫应答中起着重要作用。 表达，包括B淋巴细胞、单核细胞、造血前体细胞、内皮细胞等。 DC表面持续性表达CD40分子，且在成熟过程中呈上调性表达。 CD40．CD40L相互作用在体液免疫和细胞免疫中均具有重要作用。激 发CD8+T细胞的能力。 V 塑圭!!塑塑堕垄墨塑塑窒坚塑堕堕量塑望量堡!墅堕垫壁堕堡旦婴————————————j!量 本实验研究采用常规方法从人外周血单个核细胞(PBMCs)诱 Y辐照诱导Daudi细胞凋亡，化疗 导DC，激发型CD40mAb联合60Co 药物诱导胃癌、肺癌、肝癌细胞株凋亡后负载DC，然后与自体T细 胞共育，联合IL．2激发诱导肿瘤特异性CTL；采用流式细胞仪分析 分析DC的抗原摄取能力；3H．TdR掺入试验和51Cr释放试验分别测 定CTL的增殖和细胞毒效应。结果显示：(1)细胞因子序贯体外诱导 y辐照， (3)凋亡肿瘤细胞负载联合激发型 能有效诱导Daudi细胞的凋亡； 能促进IL．12的分泌；(4)凋亡肿瘤细胞负载后的DC在激发型 CD40mAb作用下，能激发和扩增对相应靶细胞具有高效和特异杀伤 作用的细胞毒性T细胞。 二、 体外活化扩增肿瘤抗原特异性CTL的优化方案 CD8+CTL和CD4+T细胞介导的免疫应答在肿瘤免疫中有重要的 作用。DC作为功能最强的APC，摄取、加工和处理抗原后递呈给T 细胞，赋予T细胞活化的第一信号，同时DC表面的CD80／CD86 相互作用后，介导了T细胞活化的第二信号。机体的肿瘤负荷较高及 肿瘤细胞的增殖速度较快，这就要求能在体外扩增大量的抗原特异性 CTL回输患者才能达到抑制或杀灭肿瘤细胞的目的。 5、IL．2、IL．7 在第一部分基础上，比较激发型CD28mAb、IL．1 VI 塑主壁塑塑些垒塾垫塑窒鉴塑塑堡!塑堕差堡!塑塑垫壁堕笪星堡窒—————————————．!堕—墨 的不同组合对CTL的扩增效应，通过对所扩增的T细胞计数、表型 分析、增殖测定、分泌IL．10及IFN—Y测定，建立了凋亡肿瘤细胞负 为以CTL为基础的过继免疫疗法进入临床应用奠定了基础。 研究生：席泓 导师：张学光教授 顾宗江教授 can cells