抗仪一抗胰蛋白酶多克隆抗体的制备、纯化和鉴定 - 临床儿科杂志.pdf

·122· 垦睡生趁制昌堂盘查2垒塑生§旦筮丝鲞筮!翅!堕』旦i丛!鲑!尘，』!盟!Q螋。Y丛：≥2：奠!：! ·论著· 抗仪。一抗胰蛋白酶多克隆抗体的制备、纯化和 鉴定 王彩霞朱建思周见远冯惊涛赵辉邓海欧吴小晋 聂东宋 【摘要】 目的用d。—抗胰蛋白酶(a．一antit帅sin，a．·AT)免疫家兔以产生多克隆抗体，并对产生的 抗体进行有效地纯化和效价鉴定，建立抗d。-AT多克隆抗体的生产工艺。方法按照常规方法免疫健 康家兔进行抗a。一AT多克隆抗体的制备，用ELlsA检测血清抗体效价。处死抗血清效价合格的家兔， 取血、离心，获取抗血清。联合应用辛酸．硫酸铵沉淀法和A蛋白亲和层析法对抗血清进行纯化，纯化的 多克隆抗体经15％十二烷基硫酸钠．聚丙烯酰胺凝胶电泳分析纯度后，用ELISA测定效价。结果 ELlsA检测表明，家兔产生的抗a．一AT多克隆抗体效价大于105。联合应用辛酸一硫酸铵沉淀法和A蛋 白亲和层析法进行纯化获得了纯度高、活性好的抗Q。-AT多克隆抗体。结论成功建立了抗q。一AT多 克隆抗体的生产和纯化工艺。 【关键词】d1抗胰蛋白酶；多克隆抗体；制备；纯化；鉴定 and 张肌；cdf- Prepar枷∞，·purm阻廿onchamcte吨删∞ofⅡ把叫yclonm柚tlbodyagail哦q-AT 戈缸’，Z日U肋，l-sl，zⅣDU肋n—y眦n，以以‘c0凡cer加砌抛，踟沁rs蚵矿SD眦^吼im，胁，l；gy口昭 铊JODJ．吼i，lo co删{Po耐i昭n山^Dr：z日U．，施，l·缸，西凇订：如im妇，l@J配．com 0bj∞uwTo the i咖ulli— 【Abst阳ct】 prel瑚|epolyclonalantibodyagainstQI·粕titrypsin(aI—AT)by rabbitswith to andch躺cterize f而mrabbitsinordertoestab— zing dl·AT，蛐dpurify tIIe蛐til)odi∞produced li8ht}le 0fthe 仆e rabbitswe陀 aI-AT．MetIIods productionproce8s polyclonal锄tibodyagajnst healthy imm岫izedwinl t0 tite斑we把 mutinely al·ATpreparepolycloIlal明tibodyagainstdl-AT．111e∞mm锄tibody dete姗imdEusA．11lembbitswith tite鹅werekilledtocollect by qIIalified明“body blood．1Ile蛐tisem， obtained thewhole acid-ammoniumsulf．ate and bycentrifhgaJizingb100d，werepurifiedbyc印rylic precipitation were A幽nity purifiedpolyclonal蚰tibodiesanalyzedby15％SDS，and pmtein chromato伊丑phy．The showedtht titersof were tite硌were呲聃uredEUSA．R姻ults the antisemover 卸tibody by ELISA咖ay l