若丹宁瑞利散射光谱探针测定蛋白质的研究论文.pdfVIP

第28卷，第10期 光谱学与光谱分析 V01．28，No．10，pp531—532 2OO8年lO月 and AnalySiS October。2008 SpectroscopySpectral 若丹宁瑞利散射光谱探针测定蛋白质的研究 李 燕，徐媛媛，孙舒婷，张 诺，吴 丹，魏 琴’ 济南大学化学与化工学院，山东济南250022 摘要研究了氯磺酚偶氮罗丹宁作为瑞利散射光谱探针测定蛋白质的最佳实验条件。实验表明在pH 2．80缓冲溶液和AoT微乳液存在下，蛋白质的加入可以增强氯磺酚偶氮罗丹宁的散射光强度，基于此，建 立了一种测定蛋白质的新方法。在pH为2．80的冉R缓冲溶液中，在最佳实验条件下测得牛血清白蛋白 l上g ·mL～。此方法抗干扰能力较强，有较好的选择性和灵敏度，用于实际样品奶粉和麦片中蛋白质含量的测 定，结果令人满意。 关键词氯磺酚偶氮罗丹宁；瑞利散射；光谱探针；蛋白质；实际样品 中图分类号：0657．3文献标识码：A 文章编号：1000—0593(2008)10—0531一02 1993年Pastemack[¨等首次用共振光散射研究了卟啉类 高；(2)介质的影响：实验数据表明，ACrr微乳液体系中体 化合物在核酸上的聚集，从而首次将该技术与化学过程联系 系的△JRLS最大，所以选用15“I。AOT微乳液作为体系的增 起来。而黄承志等人利用当卟啉在蛋白质或核酸上聚合组装 敏介质；(3)氯磺酚偶氮罗丹宁用量的选择：氯磺酚偶氮罗 时产生的增强的共振光散射信号与生物大分子浓度间的线性 丹宁用量在o．10mI，的1．o×10_4mo卜L“氯磺酚偶氮罗 关系，建立了测定生物大分子的新的分析方法f2’3]。近几年， 丹宁溶液之间有一稳定且大的平台区，体系的△JRLS达到最 建立的此类探针还有Bron驴PyrogaIlolRed【4]、亮黄[5]、磷锑 大；(4)离子强度的影响：当体系中的离子强度增大时，Cr 钼蓝L6一、罗丹明俘”、四黄基锰酞菁180等。 和Na+分别对氯磺酚偶氮罗丹宁和BsA有竞争和屏蔽作用， 由氯磺酚偶氮罗丹宁一BsA体系的瑞利散射光谱图可以 表明氯磺酚偶氮罗丹宁和BSA主要以静电引力相结合；(5) 2．80 看出，于393啪处体系的光散射强度与蛋白质的浓度成线 试剂加入顺序的影响：最佳顺序为：pH BR缓冲溶液、 性关系，基于此，建立了一种利用光散射技术定量测定蛋白 A(yr微乳液、氯磺酚偶氮罗丹宁、BSA。 质的新方法。 在最佳实验条件下，将所建立的实验体系分别用于牛血 为了提高体系的灵敏度和选择性，对体系的最佳实验条 件进行了优化选择。(1)酸度的影响：在pH2．80左右时，氯 蛋白酶的测定，其实验结果列于表l所示。 磺酚偶氮罗丹宁在BsA上有最大结合，电子离域程度也较 T曲le1 删y￡i∞l阳j韧撇te礴ofpro毒ejnsyster啮 蛋白质 等电点pI 回1月方程／(P：馏·mI。叫) 相关系数(r) 线性范围／(蝎·mL一1)检测限／(pg·nlL一1) BSA 4．8～4．9 △Jms=4．76+386．91口O．9940 0～1．6 O．0759 HSA 4．7 △IRLs；34．74+284．3％0．9984 0～2．4 O．1033 ova 4