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《香菇菌柄基部多糖提取及其抗脂质过氧化作用分析》 摘要：使用香菇菌柄基部和纤维素酶为材料提取粉碎粒度为200目香菇菌柄基部中多糖，测定纤维素酶对粉碎粒度为200目香菇菌柄基部的多糖的提取率。并且使用结晶紫法验证香菇菌柄基部的多糖有抗脂质过氧化。实验结果表明：香菇菌柄基部中的多糖使用纤维素酶，酶解温度为35℃，酶解时间为3h,香菇菌柄基部多糖提取率为21.75%。且用结晶紫方法验证了香菇菌柄基部中的多糖具有康脂质过氧化作用。 关键词：香菇菌柄基部 多糖提取 抗脂质氧化 结晶紫 前言：香菇素有山珍之王之称，是高蛋白、低脂肪的营养保健食品。中国历代医学家对香菇均有著名论述。现代医学和营养学不断深入研究，香菇的药用价值也不断被发掘。其中香菇多糖有抗肿瘤、抗病毒、调节免疫功能等作用。但由于食用习惯香菇的菌柄基部被大量丢弃，造成浪费。从而证明香菇菌柄基部中含有多糖并且具有抗脂质过氧化作用有重大意义。为合理开发香菇资源提供可能性和参考 实验原理 1.机体在生命活动的氧化代谢过程中不断产生各种活性氧自由基( ROS) , 它们独立存在, 近年来, 人们对多糖及复合物的抗氧化活性作用有了越来越深入的认识。已有大量的研究表明, 一大部分从天然产物中分离得到的多糖类化合物具有清除自由基、抑制脂质过氧化作用、抑制亚油酸氧化等抗氧化作用。【4】 反应方程式如下： 2.结晶紫分光光度法测·OH基本原理是: H2O2和Fe2+发生Fenton反应产生#OH。·OH容易进攻高电子云密度点,会与结晶紫中具有高电子云密度的)C=C)基团发生亲电加成反应,而使结晶紫褪色。通过测定结晶紫吸光度值的变化可间接测定出·OH的生成量。Fe2++H2O2 Fe3++·OH+OH- 3.酶解法：该法是根据食用菌细胞壁的构成,利用酶反应具有高度专一性的特点,选择相应的酶,将细胞壁的组成成分(纤维素、半纤维素和果胶质)水解或降解,破坏细胞壁结构,使细胞内的成分溶解、混悬或胶溶于溶剂中,从而达到提取的目的,且有利于提高成分的提取率;另一方面,由于许多食用菌中除了含有多糖外,还含有其他成分如淀粉、蛋白质、果胶、粘液质等,这些成分的存在往往使提取液呈混悬状态,而酶提取法可以根据提取液中杂质的种类、性质,有针对性地采用相应的酶,将这些杂质分解或除去,以改善提取液的澄清度,提高产品的稳定性。 实验器具及试剂 实验材料：香菇菌柄、纤维素酶、 实验器材：玻璃棒、纤维酶、恒温水浴锅、离心机、烘干箱、分光光度计、50ml比色管、100ml量筒、100ml烧杯、200目筛、1ml移液管、ph试纸、研钵、电子天平、胶头滴管 实验试剂：结晶紫0.4mol/l、硫酸铁溶液 1mol/l、过氧化氢2mol/l、乙醇、sevage试剂（三氯甲烷∶正丁醇（体积比）＝４∶１）、蒸馏水、结晶紫染液（１．０ｇ９５％乙醇 ２０ｍｌ１％草酸铵［（ＮＨ4）2Ｃ2Ｏ4］水溶液 ８０ｍｌ）说明：将结晶紫溶解于９５％乙醇中后，与草酸铵溶液相混合，静置４８小时使用。此染液稳定，置密闭的棕色瓶中可储存数月。 得线性回归方程为:Y=0.064X－0.001(Y:吸光度，X:糖含量)。r=0.9965，线性范围0.0～1.0mg/mL。 香菇多糖抗脂质过氧化作用 对三个50 ml具塞比色管分别标记1、2、3并分别加入1.5 ml结晶紫(0.4mmolL-1),2.0 ml FeSO4溶液(1mmolL-1)。 向标记1的具塞比色管中加入1.0 mLH2O2溶液(2.0 mmolL-1)。向标记2的具塞比色管中加入先加提取出来的香菇多糖样品1.0ml和1.0 mLH2O2溶液(2.0 mmolL-1)。 调节三个具塞比色管的pH值到4.0,稀释到50 ml并摇匀,放置30 min后 测580 nm处的吸光度其中1为Ab,2为As，$A=A0-Ab来表征。 测定其吸光度As则表观抗羟自由基氧化率S可以按下式计算: S(% )=(As-Ab) /(A0-Ab)*100% 思考题 1.影响多糖提取量的因素有哪些？ 2.哪些操作会导致实验结果误差增大？ 3.有哪些其它方法可以测定抗脂质过氧化作用？ 实验结果 香菇菌柄基部多糖提取率： 样品吸光度值：0.695 样品浓度：10.875mg\mL 样品溶液体积：40mL 样品质量：435mg 样品干重：2g 样品多糖提取率：21.75% 证明香菇菌柄基部中多糖的抗脂质过氧化作用： Ab：0.183 AS：0.211 Ao：0.307 则：S(% )= (As-Ab) /(A0-Ab)*100%= 22.58% 即证明香菇菌柄基部中多糖具有抗脂质过氧化作用