一株抗铜镉细菌的分类鉴定和基因组BAC文库的构建.pdf

摘 要 Cu”和2．0 从湖北省大冶市铜矿区土壤中分离到一株能分别抗4．5mmol／L mmolfl_．Cd“且能同时抗3．0 因其具有较高抗铜和镉的能力，所以是研究重金属抗性机理的有价值材料。实验表 明，镉抗性基因的表达受铜抗性基因的诱导。通过质粒抽提、质粒快检、脉冲场凝 胶电泳等检测，在供试菌株细胞内没有发现质粒的存在，因此可以推断重金属抗性 基因位于染色体上。这不同于以前重金属抗性基因多位于质粒上的报道。对分离到 的NI’G．01进行了形态学观察和生理生化鉴定以及16SrDNA序列分析。结果显示 菌株NTG-01为细菌，革兰氏染色阴性，短杆状，鞭毛周生，V-P试验阳性，甲基 红实验阴性，利用葡萄糖产酸产气，不能在TIS培养基上产生H2S．赖氨酸和鸟氨 酸脱羧酶试验呈阳性，精氨酸脱羧酶和双水解酶试验呈阴性，氧化酶和脲酶试验阴 性，接触酶和明胶液化试验阳性，但后者反应迟缓，一周后才观测到结果。通过对 菌株NTG．01的16SrDNA进行序列测定和同源性比对，发现它与产气肠杆菌的16S rDNA序列有高达99％的同源性，结合形态学和生理生化结果，将其鉴定为产气肠 杆菌(Enterobacter G．01对9种重金属的最低抑 aerogenes)。本研究同时测定了WI 制浓度值(Minimal inhibitory 次为：Ag(O．00625mmol／L)Pb佃．9retool／L)Zn(1．6 nⅢnol／L)=CdCr(2．11mmo札)Cu(4．5mmol／L)Mn{26．7retool／L)，由上结果可 知NTG．01对多种重金属具有普遍较高的抗性。另外本研究也构建了NTG．01平均 长度为40kb的BAC文库，它覆盖了所报道的完整抗铜镉基因4倍大小，因此理论 上讲可以从这个BAC文库中克隆到完整的抗铜镉连锁基因。 本研究尝试进行了抗铜镉基因的克隆，为进一步构建多元修复重金属污染的基 因工程菌株，修复重金属污染环境奠定了基础。 关键词：重金属抗性；产气肠杆菌；BAC文库 Abstract AbacterialstrainNTG-01whichwas resistantto Cu”and2．0mmoI／L 4．5mmol／L Cd”wasisolatedfromthesoilofa minein DaYeofHubei copper city province．The resistanceofthestraintocadmiumand is in theresistant hjgll cOpper studying important mechanismsofbacteriato thatthe of showed heavymetals．Experiments expression cadmium-resistantwasinducedthe wasfound gene by cOpper-resistantgene．Noplasmid and inthecellafter