广州医科大学《临床免疫学检验》10化学发光技术.pptVIP

* 反应的发光效率、光辐射的能量大小以及光谱范围，完全由发光物质的性质所决定，每一个发光反应都具有其特征性的化学发光光谱和不同的化学发光效率。 * 与过氧化氢反应能自发光，但强度较弱，持续时间较短，本底高，少用。 * * 直径500nm，Fe2O3 * 校准：浓度-发光量值 质控：发光量值-浓度 * * 测量池是电化学发光过程中所有电化学发光反应进行的场所。反应液由蠕动泵运送入测量池，反应后由测量池流出。一个激发电极在测量池的下方，两个测定电极安装在激发电极上方的两侧，留出一个清晰的窗口以便使发射的光子被光电倍增管收集。在测量池下装置可移动的用以吸引磁性微粒的磁铁。 * * * PRISCA 4.0可以提供经多种变量因子修正的MoMs，像妊娠妇女年龄、母亲体重、人种、吸烟情况、是否双胎妊娠、糖尿病情况以及是否体外受精。一旦得到经修正的MoM，即可计算这些数值的每一个可能性系数，然后所有的可能性系数结合母亲年龄相关风险而产生最终的风险评估结果。 * 当出现异常结果时，尤其是移植科病人，询问临床相关情况以排除检测前的影响因素。 * 原理（ALP标记化学发光免疫分析示意图 ） 洗涤 弃上清 原理（HRP标记化学发光免疫分析示意图 ） 技术要点 抗原抗体反应 双抗体夹心法 双抗原夹心法 固相抗原竞争法 酶标记免疫复合物（B）和游离酶标记物（F）分离 磁颗粒分离法 微粒子捕获法 包被珠分离法 技术要点 酶促发光反应 ALP法 标准曲线制作和标本结果计算 试剂校准：标准曲线的发光量值 质控品验证校准曲线的有效性 根据标本的发光量值自动计算待测物的含量 方法学评价 灵敏度高 酶和发光两级放大 发光增强剂 影响因素 非特异性吸附 洗涤不够彻底可因其他来源的过氧化物酶类物质产生非特异性酶发光反应 标本中含影响标记酶活性的物质 二、化学发光免疫分析 原理（吖啶酯标记化学发光免疫分析示意图 ） 技术要点 抗原抗体反应 双抗体夹心法 双抗原夹心法 间接法 竞争法 酶标记免疫复合物（B）和游离酶标记物（F）分离 磁颗粒分离法 技术要点 发光反应 加入氧化剂（H2O2） 加pH纠正液（NaOH）使呈碱性 吖啶酯分解发光 标准曲线制作和标本结果计算 试剂校准：标准曲线的发光量值 质控品验证校准曲线的有效性 根据标本的发光量值自动计算待测物的含量 方法学评价 发光噪音低，反应简单、快速 直接标记，结合稳定，不影响标记物的生物学活性和理化特性 固相磁粉包被面积大，清洗分离简便、快捷 瞬间发光对检测仪的灵敏度要求高 特定项目试剂 检测试剂含以下组分： a、三联吡啶钌标记的抗体 b、生物素化合的抗体 c、链霉亲和素（SA）磁性微粒 d、三丙胺（TPA）溶液 e、洗涤液 三、电化学发光免疫分析 原理： 电化学发光免疫测定 (Electro Chemiluminescence ImmunoAssay，ECLIA） 系统试剂 步骤一 在孵育杯中加试剂三联吡啶钌标记的抗体、生物素化合的抗体及待测标本（含抗原） 反应在液相中进行，37℃下9分钟完成 步骤二 在上述反应液中加入试剂SA磁性微粒 反应在接近液相的条件中进行，37℃下9分钟完成 步骤三 光子检测 反应液输入测量池，由于磁铁吸引，磁性微粒被吸着在电极上，其余反应物游离在测量池，完成游离的和结合的标记抗体的分离。 TPA溶液送入测量池，将残余的游离标记抗体排出测量池，在测量池中充满TPA溶液。 电极上通电，三联吡啶钌与TPA发生电化学发光反应，发出的光被光电倍增管收集，测定光强度。 最后，终止电压，移开磁珠，加入清洗液冲洗流动测量室，准备下一个样品测定。 技术要点 抗原抗体反应 双抗体夹心法 双抗原夹心法 间接法 竞争法 酶标记免疫复合物（B）和游离酶标记物（F）分离 磁颗粒分离法 技术要点 发光反应 加三丙胺的缓冲液，电极加压，启动ECL反应 标准曲线制作和标本结果计算 试剂校准：标准曲线的发光量值 质控品验证校准曲线的有效性 根据标本的发光量值自动计算待测物的含量 方法学评价 持续时间长，信号强度强，易测定、控制 直接标记，结合稳定，不影响标记物的生物学活性和理化特性 灵敏度高、线性范围宽、反应时间短 第四节 化学发光免疫技术的应用 检测项目 甲状腺激素: T3、T4、 FT3、FT4、TSH、TGAb、 TPOAb 生殖激素：β-HCG、FE3、AFP、 PRL、FSH、LH、 PGN、E2、TES 肾上腺和垂体激素：ALD、COR、GH、PTH、ACTH 贫血因子：VitB12、FOLATE、FER 肿瘤标志物：A