CTX—M型阴沟肠杆菌的基因克隆及原核表达产物特性研究.pdfVIP

JournalofTr0oicalMedicineVo1．8No．10Oet．2008 文【章编号】 1672—3619(2008)10．1004．05 · 基 础 研 究 论 著 · CTX—M型阴沟肠杆菌的基因克隆及原核表达产物特性研究 江洁华 ，徐韫健 ，廖伟娇 H，李乃健 (1．广州医学院第一附属医院检验科，广州 510120； 2．广州医学院06级检验本科，广州 510180) 摘【要】 目的 对阴沟肠杆菌所产CTX．M型B一内酰胺酶进行基因克隆、原核表达重组质粒的构建及其特 性研究。方法 以产CTX．M型B一内酰胺酶的阴沟肠杆菌45号基因组DNA为模板，设计两对引物 PCR扩增 CTX．M，将其克隆人pGEM．T载体后测定该核苷酸序列，再将CTX．M基因克隆到pGEX．6P．3表达质粒并转入感 受态 BL21，选择阳性菌落进行药物敏感试验和酶动力学检测。结果 PCR扩增出大小为 876bp和 1067bp的 基因片段 ，与GenBank上CTX—M．9和 CTX—M一3酶的基因序列同源性为 100％。CTX．M一3型重组菌株药敏试验 结果与原菌株相比，对青霉素类和头孢噻肟具有明显的水解作用 ．第三、四代头孢菌素对之较为稳定，动力学结 果与酶稳定性结果基本一致。结论 重组质粒 pGEX一6P一3／CTX—M构建成功 ，CTX—M一3型重组菌株与原菌株比 较 ，对 B一内酰胺类抗生素的敏感性和稳定性增加 ，亲和力下降。 【关键词】 CTX．M型；克隆；重组质粒；酶动力学 中图分类号：R378．2 文献标识码：A CloningandProkaryoticExpressionofCTX-M 13·lactamaseofEnterobactercloacae JIANGJie-hua，XUYun—jian，LIAOWei-jiao，LINai—jian (DepartmentofClinicalLaboratory，theFirstAffiliatedHospitalofGuangzhouMedicalCollege， Guangzhou，510120，China) A【bstract】 Objective Toclone，expressandcharacterizetheCTX—M3-lactamaseofEnterobactercloacoe． Method The6Z。 一MwasamplifiedbyPCR andsequencedafterbeingsubclonedinpGEM—Tvector．Theblacrx．M was then cloned intopGEX一6P一3vectorand transformed intoE．coliBL21． Drug sensitivity， thestability andkinetic parametersof31-1actamasehydrolysisoftherecombinantstrainwereexamined．ResultSequencesofblacax_~shared100％ aminoacid identitywith 6 Ⅸ-M_3and6妞H_M．9published in GenBank． TherecombinantstrainwasresistanttO penicillin and cefetaxime， susceptibleto the thirdand forth generation ofcephalosporin． Theresultsofkinetic parameterswere thesameasstabilitytest． Conclusion ProkaryoticrecombinantplasmidpGEX一6P一3／CTX—M had beenconsturctedsuccessfully．Comparedwithstrain