NK细胞课题1.doc

福建医科大学08级硕士研究生学位论文开题报告 课题题目 慢乙肝患者NK细胞与肝细胞损伤程度的关系研究 一．研究背景和立题依据 乙型肝炎病毒(HBV)感染是目前导致肝脏疾病的主要病因。因而是医学界关注的重点。 慢性乙型肝炎的自然史是以反复肝炎发作和缓解为特征常表现为HBeAg出现，血清转氨酶持续或间歇升高以及。慢性乙型肝炎的发病机制较为复杂，迄今为止还远远未能阐明。普遍认为HBV本身不直接损害肝细胞，机体清除HBV引发宿主免疫反应异常，是发病机制中的主要环节，导致肝细胞功能的。此的波动为我们研究肝脏炎症活动的影响因素提供了一个好的契机。目前迫切需要了解免疫反应哪些HBV感染的肝损伤这将有助于增强病毒控制同时抑制或阻碍肝脏炎症，形成合理的免疫治疗方案。 NK细胞是介导肝脏损伤的主要组成 传统观念认为感染HBV患者的免疫介导肝损伤原因是病毒特异CD8+ T细胞即细胞毒性T细胞(cytotoxic T lymphocyte，CTL)通过机制杀死感染肝细胞。但近来的许多研究中发现在病毒特异性CTL不足以控制病毒复制的情况下，可以募集其他炎症细胞，造成肝脏的损伤。而渗入的非特异性淋巴细胞的最大组分之一是NK细胞。已经证实，人体肝脏含有大量的天然免疫细胞如NK细胞、NK T细胞、γδT细胞等，此类细胞约占整个肝脏淋巴细胞的2／3。其中NK细胞约占30％，NKT30％，而传统T细胞亚群(CD3+CD56-)仅占30％左右。天然免疫细胞在肝脏形成的这种“优势状态”可能也预示其在肝脏免疫系统中。并且国内外利用小鼠模型证实肝脏NK细胞肝细胞损伤，如转基因小鼠中通过低剂量Con A刺激后经NKG2D/NKG2D配体识别内NK细胞诱导炎症肝损伤, 但还远远未阐明NK细胞是通过何种分子和途径介导肝脏损伤的。 NK细胞是通过两条途径：一是直接肝细胞，二是分泌细胞因子如IFN-γ，TNF-aNK细胞胞毒活性影响肝脏损伤 研究发现作为天然免疫系统的组成之一，NK细胞具有不需要特异性抗原的刺激就能直接杀伤被感染的细胞能力，此为NK细胞的天然细胞毒性。但是它的具体作用机制尚未完全阐明。近来Zou Y等感染MHV-3的Balb/cJ小鼠制作暴发性肝炎模型，肝脏NK细胞为效应细胞，肝细胞（YAC-1）为靶细胞，体外细胞毒试验证实肝脏NK细胞对病毒感染的肝细胞的杀伤活性显著增强。提示肝脏NK细胞可能通过自身的胞毒活性损伤肝细胞，形成炎症还需要进一步证实。而在HBV转基因小鼠代表的慢携带者中NK细胞的活性和细胞毒性明显下降。他们认为是与NK细胞内在功能缺陷相关。此外，有学者在研究肝癌患者时也发现外周血NK细胞的胞毒活性下降，杀伤靶细胞能力减弱的情况出现。由于人临床试验的限制，人NK细胞自然胞毒活性对肝脏损伤的研究很少，特别是不同炎症状况下，NK细胞胞毒活性是否有差异也不清楚。因而必要在这一方面进行相应的研究，为了解在病毒感染后天然免疫反应的直接杀伤作用提供依据。Con A活化的NK细胞对肝细胞的细胞毒作用依赖于NK细胞与肝细胞之间NKG2D-ligand相互识别【1】。同时有学者应用基因芯片技术筛选肝炎重型化相关基因，初步发现NKG2D基因在慢性重型乙肝 (FHB) 外周血单个核细胞 (PBMC) 上表达上调，提示重型乙肝免疫细胞 NKG2D过度表达可能通过激活体内 NK细胞并在 HBV致肝损伤中发挥作用【4】。但是缺少慢性乙型肝炎NK细胞NKG2D的表达研究，因此，我们希望通过研究NK细胞上NKG2D的表达来进一步验证NK细胞天然胞毒活性对慢性乙型肝炎肝脏损伤程度的影响。 IFN-γ和TNF-a介导肝脏损伤 IFN-γ和TNF-a是NK细胞分泌的主要细胞因子，过去的研究主要集中在抗病毒作用方面，反而对损伤肝细胞的影响研究较少。Hou，X 等通过给小鼠联合注射聚肌胞昔酸（poly I:C）和半乳糖苷（D-GalN）,建立了一种比较新的肝炎模型, 发现NK细胞分泌的IFN-γ和Kupffer细胞分泌的TNF-a协同诱导肝脏损伤，并且中和体内的TNF-a后, poly I:C/D-GalN诱导的肝脏损伤明显减弱。有趣的是，给D-GalN致敏鼠注射IFN-γ和TNF-α时, 两种细胞因子同时注射诱导的肝脏损伤远大于单独注射其中一种细胞因子引发的损伤,表明IFN-γ和TNF-α在介导肝脏损伤时有协同效应。而在Zou Y 等研究中则发现肝脏NK细胞引发以TNF-α和IFN-γ为主的细胞因子风暴在肝细胞的损伤中可能发挥重要作用，同时还发现TNF-a更显著，相反T细胞分泌IFN-γ的水平却未见明显改变，进一步说明NK细胞分泌的细胞因子介导肝细胞损伤。此研究是以MHV-3感染 BALB/cJ小鼠作为模型代表暴发性肝炎，。此外国内陈永艳等利用HBV转基因小鼠C57BL／