人C肽(C-Peptide)ELISA试剂盒说明书.doc

人C肽（酶联免疫分析盒使用说明书 预期应用 ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养物上清或其它相关液体中C-Peptide含量。 实验原理本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定中水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入抗原、，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的呈正相关。用酶标仪在nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。 试剂盒组成 酶联板：一块 标准：瓶，稀释液稀释5 pg/mL，312 pg/mL，其原液直接作为最高标准浓度，样品稀释液稀释液ml/瓶稀释液1×10ml/瓶稀释液1×10ml/瓶l/瓶（1：100）临用前以检测稀释液A 1：100稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100ul），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如1ul检测溶液A加99ul检测稀释液l/瓶（1：100）临用前以检测稀释液B1：100稀释。稀释方法同检测溶液A。 底物溶液：1×10ml/瓶。 浓洗涤液1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 终止液1×10ml/瓶（N H2SO4）。 的采集及保存 -20℃，且应避免反复冻融1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。操作步骤 试剂或样品稀释时，混匀。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度时，应在试管中将样品用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。待测样品孔ul，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻混匀，37℃反应120分钟甩干每孔加100ul（取1ul检测溶液A加99ul检测稀释液37℃,60分钟。 温育60分钟后，甩干洗板3次350ul/每孔，甩干。 每孔加100ul，37，0分钟，甩干洗板5次，350ul/每孔，甩干。依序每孔加ul，37℃避光显色分钟依序每孔加溶液50ul，终止反应。用酶联仪在4nm波长依序测量各孔的光密度（OD值） 注： 1． 每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是最后加溶液及NH2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。 2．为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内。洗板方法手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的洗涤缓冲液至少0.ml注入孔内，浸泡1-2分钟根据需要，重复此过程数次。自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。计算以标准物的浓度为横坐标（对数坐标），OD值为纵坐标（普通坐标），在半对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以，即为样品的实际浓度。 乘以pg/mL -20,000 pg/mL 说明 1．-20℃（较长时间不用时）；2-8（频繁使用时）。．浓洗涤液会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。 酶联板