硫代葡萄糖苷的测定.DOC

NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T1103.3—2006 转基因植物及其产品食用安全检测 抗营养素第3部分：硫代葡萄糖苷的测定 Safety assessment of genetically modified plant and derived products Part 3: assay of anti-nutrients glycosinolate 2006-07-10发布 2006-10-01实施 中华人民共和国农业部 发布 NY/T1103.3—2006 前 言 本标准附录A为资料性附录，附录B为规范性附录。 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国农业转基因生物安全管理标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：中国农业科学院油料作物研究所、中国疾病预防控制中心营养与食品安全所、农业部科技发展中心、中国农业大学、天津市卫生防病中心。 本标准主要起草人：李培武、杨月欣、丁小霞、韩军花、张文、李宁、汪其怀、黄昆仑、刘克明、刘培磊、连庆。 本标准首次发布。 NY/T1103.3—2006 转基因植物及其产品食用安全检测 抗营养素第3部分：硫代葡萄糖苷的测定 范围 本标准规定了转基因油菜籽及其产品中硫代葡萄糖苷的高效液相色谱高效液相色谱GB 5491 粮食、油料检验 扦样、分样法GB/T 14488.1 油料种籽含油量测定法GB/T 14489.1 油料水分及挥发物含量测定法转基因油菜籽 genetically modified rapeseed 转基因油菜籽产品 products derived from genetically modified rapeseed response factors 待测硫代葡萄糖苷的摩尔吸光系数与内标的摩尔吸光系数的相对比值。 原理 NY/T1103.3—2006 用70% 甲醇水溶液提取硫代葡萄糖苷，然后在阴离子交换树脂上纯化，并酶解脱去硫酸根，反相色谱柱分离，紫外检测器检测硫代葡萄糖苷。 试验材料 转基因油菜籽及其产品、受体油菜籽及其产品。如果对转基因油菜籽产品中的硫代葡萄糖苷进行测定，转基因油菜籽产品和受体油菜籽产品的处理条件应相同。 上述材料的水分含量和种植环境应基本一致。 试剂 除非另有说明，仅使用分析纯试剂；水为蒸馏水。 6.1 硫酸酯酶溶液：Helix pomatia H1型（EC 3.1.6.1），每毫升硫酸酯酶溶液的活性单位不低于0.5，硫酸酯酶溶液应即配即用。 6.2 葡聚糖凝胶悬浮液：称取10 g DEAE Sephadex A 25葡聚糖凝胶，浸泡在过量的2 mol/L醋酸溶液中，静置沉淀，再加入2 mol/L醋酸溶液，直到液体体积是沉淀体积的2倍，于4℃冰箱中存放，待用。 6.3 70%甲醇溶液：取70 mL甲醇，加水定容至100 mL。 6.4 0.02 mol/L醋酸钠溶液：称取0.272 g醋酸钠（CH3COONa·3H2O），加入800 mL水溶解，用醋酸调节溶液的pH值至4.0，加水定容至1 L。 6.5 6 mol/L甲酸咪唑溶液：称取204 g咪唑，溶解于113 mL甲酸中，待溶液冷却后加水定容至500 mL。 6.6 内标：用丙烯基硫代葡萄糖苷（Mr=415.49）作内标，当样品中含有丙烯基硫代葡萄糖苷时，用苯甲基硫代葡萄糖苷（Mr=447.52）作内标。对硫代葡萄糖苷含量低于20.0 (mol/g的样品，可将下述6.6.1至6.6.4中的内标溶液浓度降为1 mmol/L至3 mmol/L。内标溶液在4℃的冰箱中可存放三周，在-18℃条件下可保存更长时间，内标溶液的纯度检定见附录A。 6.6.1 5 mmol/L丙烯基硫代葡萄糖苷溶液：称取207.7 mg丙烯基硫代葡萄糖苷溶解于80 mL水中，加水定容至100 mL。 6.6.2 20 mmol/L丙烯基硫代葡萄糖苷溶液：称取831.0 mg丙烯基硫代葡萄糖苷溶解于80 mL水中，加水定容至100 mL。 6.6.3 5 mmol/L苯甲基硫代葡萄糖苷溶液：称取223.7 mg苯甲基硫代葡萄糖苷溶解于8 0mL水中，加水定容至100 mL。 6.6.4 20 mmol/L苯甲基硫代葡萄糖苷溶液：称取895.0 mg苯甲基硫代葡萄糖苷溶解于80mL水中，加水定容至100 mL。 NY/T1103.3—2006 6.7 流动相A：超声波脱气30s的水。 6.8 流动相B：取200 mL色谱级乙腈，加入800 mL水，浑匀，超声波脱气30s。 仪器和设备 7.1 通常实验室仪器设备。 7.2 研钵或微型研磨机。 7.3 聚丙烯离子交换微柱：底部筛板为100目