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第三节高效液相色谱法 High-performance liquid chromatography 3.1 、液相色谱仪 3.2 、固定相与流动相 3.3 、分离类型与原理 3.4 、日常操作和维护 经典LC与HPLC的比较 经典LC HPLC 柱内径 1~5 cm ~0.46 cm 柱长 50~100 cm 15~25 cm 粒径 150~200 µm ~5 µm 柱压 1~10 atm 50~200 atm 分离时间 0.5 h~天 10 ~ 60 min HPLC与GC的比较 HPLC与GC的比较 分析对象及范围：GC占有机物总数20%；HPLC可分析高 沸点、高分子量的化合物，占有机物总数80%。 流动相的选择：GC为有限几种“惰性”气体，只起运载 作用；HPLC为混合液体，选择机会多。 操作温度：GC需高温；HPLC通常在室温下进行。 检测器：GC 灵敏度普遍高。 柱效：毛细管GC可通过增加柱长提高总塔板数。 分析成本：HPLC高 柱外效应：HPLC突出 高效液相色谱法的特点 高压、高效、高速 高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。 3.1 、液相色谱仪及主要部件 1、流程 2 、主要部件 (1) 高压输液泵 ♥压力：150 ～350 ×105 Pa。 ♥应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等 特性 输液泵种类：恒压型和恒流型 恒压泵 可迅速获得高压，适于柱的匀浆填充。但 因泵腔体积大，在往复推动时，会引起脉动。 恒流型 溶剂流量恒定，与柱填充情况无关，使用 较多。有机械注射式和机械往复式两种。应用最多的 是机械往复式恒流泵，脉动小。对流量变化敏感的检 测器也会有噪声干扰， 单 向 阀 到色谱柱 脉动阻 密封 尼器 马达 球阀 往复式拉动 溶剂 机械往复柱塞泵示意图 (2) 梯度淋洗装置 高压梯度及低压梯度 溶剂 A 比例阀（溶剂混合点） 溶剂 A 泵 A